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- AAT Bioquest
- 13408
- 美国
- 2025年07月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
胱天蛋白酶Caspase 荧光底物 FITC-C6-DEVD-FMK 绿
- 英文名：
FITC-C6-DEVD-FMK
- 保存条件：
FITC-C6-DEVD-FMK
- 库存：
胱天蛋白酶Caspase 荧光底物 FITC-C6-DEVD-FMK 绿
- 规格：
100UG
英文名称：FITC-C6-DEVD-FMK
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | 994.99 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 FITC-C6-DEVD-FMK 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，的caspases在凋亡中占有主导地位，FITC-C6-DEVD-FMK能提供简便灵敏的方法对活细胞中对的caspase-3进行检测。FITC-C6-DEVD-FMK在凋亡细胞中具有通透性，性和不可逆结合的caspase-3的特点，是带有FITC荧光标记的caspase-3抑制剂。FITC标记能直接通过荧光显微镜，流式细胞仪或者荧光酶标仪测定的Caspase 3。
操作方法
以下协议仅提供指导，应根据您的特定需求进行修改。
使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定
1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。
2.如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。
3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。
4.使用荧光酶标仪监测荧光，或使用酶标仪监测吸光度。
使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定
1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。
2.根据需要处理细胞。
3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。
4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。
5.用HHBS清洗细胞至少一次。
6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）
1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。
2.根据需要处理细胞。
3.以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。
4.用HHBS清洗细胞至少一次。
5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
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文献和实验参考文献
Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulans
Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361
[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491
Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
Authors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.
Journal: Apoptosis (2000): 265
C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
Authors: Hashiramoto A, Sano H, Maekawa T, Kawahito Y, Kimura S, Kusaka Y, Wilder RL, Kato H, Kondo M, Nakajima H.
Journal: Arthritis Rheum (1999): 954
1、Caspase Activity Detection Kit (FITC-VAD-FMK) 目录号：QIA90 包装：100T/Kit 本试剂盒为您提供了一种快速而灵敏的活细胞内的Caspase 活性的荧光检测方法，所有操作可以在1.5 小时内完成；可以用荧光显微镜、荧光读板仪或流式细胞仪对实验结果进行定量分析；其荧光为绿色荧光，最大激发波长约为485nm，最大发射波长约为535nm。本试剂盒可用于多种种属来源的Caspase 的活性检测，其特别设计的底物使该试剂盒可用于检测
：收获细胞正常或凋亡细胞PBS洗涤制备细胞裂解液，加Ac-DEVD-AMC(caspase-3四肽荧光底物)37 °C反应1 h荧光分光光度计(Polarstar)分析荧光强度(激发光波长380 nm，发射光波长为430-460 nm)。 结果： 3. 流式细胞术分析 方法：收获细胞正常或凋亡细胞PBS洗涤加Ac-DEVD-AMC37 °C反应1hUV流式细胞计分析caspase-3阳性细胞数和平均荧光强度。 结果： 七、凋亡相关
：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。 方法：收获细胞正常或凋亡细胞?PBS洗涤?制备细胞裂解液?加Ac-DEVD-AMC（caspase-3四肽荧光底物）?37°C反应1h?荧
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