cho丨CHO-dhfr 中国仓鼠卵巢细胞丨缺失二氢叶酸还原

CHO-dhfr 中国仓鼠卵巢细胞
一、细胞介绍

该细胞为二氢叶酸还原酶缺陷细胞。在没有HT(次黄嘌呤-胸腺嘧啶)时细胞会死亡。细胞培液中加氨甲喋呤可以防止对药物低抗性的回变细胞的生长。

二、细胞特性

1)来源：中国仓鼠

2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。

3)含量：>1x106 个/mL

4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。

四、细胞培养步骤

1.培养基及培养冻存条件准备：(此细胞比较难养，请严格遵循培养条件)

1)准备IMDM培养基(GIBCO,货号12200036);优质胎牛血清，15%，双抗1%;添加添加0.05mM次黄嘌呤，0.016mM胸腺嘧啶，100nM氨甲喋呤。

用于表达蛋白时，也可使用悬浮培养基，使细胞悬浮生长。

2)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

五、细胞处理

1)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法

1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存

下面T25瓶为例

1)细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2)1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3)将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。