GC-1spg小鼠精原细胞系丨GC-1spg细胞

细胞介绍

该细胞是B型精原细胞通过转染pSV3-neo(含有SV40大T抗原和新霉素耐药编码序列的质粒)而产生的永生化，细胞表达两种睾丸特异性异蛋白，细胞色素c和乳酸脱氢酶C4。

细胞特性

1)来源：睾丸

2)形态：神经元

3) 含量：>1x106 个/mL

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。

4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。

5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备

1) 准备DMEM(GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，培养基;北美胎牛血清，10%;双抗，1%;

2) 培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养细胞时请注意

(1)传代时细胞的接种密度应控制在 1万-4万 活细胞/平方厘米。

(2)选用高质量的胎牛血清配制培养液。