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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Human Normal Airway Epithelial Cells
- 库存:
9999
- 供应商:
厦门逸漠生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
详询
- 细胞类型:
贴壁/悬浮
- 品系:
人源细胞系
- 组织来源:
人正常呼吸道
- 相关疾病:
详询
- 物种来源:
详询
- 免疫类型:
详询
- 细胞形态:
上皮细胞样
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 器官来源:
详询
- 运输方式:
复苏发货或干冰发货(顺丰快递)
- 年限:
长期
- 生长状态:
正常
细胞特性
1) 来源:人正常呼吸道
2) 形态:上皮细胞样
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T75瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
(1)使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。
(2)收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至250px培养皿或者T75培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备Keratinocyte Serum Free Medium培养基(Keratinocyte Serum Free Medium (K-SFM):GIBCO,货号17005-042, Kit中含有两种添加因子:牛脑脊液提取物(BPE),表皮生长因子(EGF),培养细胞时添加:0.05 mg/ml BPE,5 ng/ml EGF,10 ng/ml cholera toxi。注意,添加好的培养基不能过滤。(另外,有文献使用DMEM/F12培养基,添加10%胎牛血清)
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。




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