- ￥5505
- 翌圣生物（Yeasen）
- 12254ES08
- 上海
- 2025年12月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant)
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
干冰运输，-20°C存放。
- 规格：
24T
| 产品名称 |
产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant) MaxUp rRNA去除试剂盒（植物） |
12254ES24 | 24T | 18363 |
产品描述
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Plant)利用RNase H消化法去除植物来源总RNA中的核糖体RNA（包括细胞质18S、25S rRNA，线粒体18S、26S rRNA，叶绿体16S、23S rRNA）以保留信使RNA（mRNA）和其它非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于cDNA合成或其它下游应用。
适用范围
适用于多种植物来源的100 ng~2 μg 总RNA样品；适用于完整或部分降解RNA样品。
产品组分
| 组分编号和名称 | 12254ES08 | 12254ES24 | |||
| 12254-A |
|
Hybridization Buffer | 24 μL | 72 μL | |
| 12254-B |
|
Probe Mix(Plant) | 16 μL | 48 μL | |
| 12254-C |
|
RNase H Buffer | 24 μL | 72 μL | |
| 12254-D |
|
RNase H | 16 μL | 48 μL | |
| 12254-E |
|
DNase I Buffer | 220 μL | 660 μL | |
| 12254-F |
|
DNase I | 20 μL | 60 μL | |
运输与保存方法
干冰运输，-20°C存放。
有效期一年。
注意事项
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。
3. RNA样品最大投入体积为10 μL，若样品体积较大，可先进行浓缩。
自备材料
1. RNA纯化磁珠：Hieff NGS® Cleaner（Cat#12602）或其他等效产品。
2. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) （Cat#11201）或其他等效产品；
3. 其他材料： 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
操作步骤
1. 探针杂交
1.1 将探针和杂交Buffer从-20 °C 取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
1.2 准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用Nuclease free H2O稀释至10 μL。
1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。
表 1 探针杂交反应体系
| 名称 | 体积（μL） |
| Hybridization Buffer | 3 |
| Probe Mix(Plant) | 2 |
| Total RNA | 10（100 ng~2 μg） |
| Total | 15 |
1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。
表 2 探针杂交反应程序
| 温度 | 时间 |
| 热盖105°C | On |
| 95℃ | 2 min |
| 95℃-22℃ | 0.1℃/s |
| 22℃ | 5 min |
| 4℃ | hold |
2.1将RNase H消化试剂从-20 °C取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表 3 所示，配制RNase H消化反应体系。
表3 RNase H消化反应体系
| 名称 | 体积（μL） |
| RNase H Buffer | 3 |
| RNase H | 2 |
| 上步产物 | 15 |
| Total | 20 |
2.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中，设置反应程序：37℃，30 min； 4℃，hold，进行RNase H消化反应。
3. DNase I 消化
3.1将DNase I消化试剂从-20 °C 取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表4所示，配制DNase I消化反应体系。
表4 DNase I消化反应体系
| 名称 | 体积（μL） |
| DNase I Buffer | 27.5 |
| DNase I | 2.5 |
| 上一步产物 | 20 |
| Total | 50 |
3.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中，设置反应程序：37℃，30min； 4℃，hold，进行DNase I消化反应。
4. RNA纯化
4.1 准备工作：将 Hieff NGS® RNA Cleaner （Cat#12602）磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制80%乙醇。
4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。
4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner（2.2×，Beads:RNA=2.2:1）至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育 5 min。
4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3 min），小心移除上清。
4.5 保持PCR管始终置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育 30 sec 后，小心移除上清。
4.6 重复步骤 4.5，总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。
4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠（5~10 min）。
4.8 RNA洗脱：将PCR 管从磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H2O（或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液），使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置 5 min。
4.9将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约3 min），小心移取 10 μL 上清（可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整）至新的Nuclease free PCR 管中。
【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80℃存放。
案例展示
qPCR验证: 以1μg 拟南芥叶片 RNA进行rRNA去除，利用qPCR对比去除前后rRNA基因和mRNA基因的表达量变化。
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ZOOM® IPGRunner™系统：简化的双向电泳（2D gel eletrophoresis）
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