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1.包装清单:
| 产品编号 | 名称 | 规格 | 特性 |
| PER0020 | AutoExp原核培养基 | 20 ml/100 ml/ 500 ml | 无需IPTG诱导,蛋白即可自动大量表达 |
2.保存条件:本品置于
3.产品简介:
FrdbioRAutoExp是Frdbio公司推出的新型蛋白诱导表达培养基组分。大肠杆菌表达菌株在含AutoExp的培养基中生长到对数后期能够开始自行大量表达目的蛋白。与传统的IPTG诱导相比,使用AutoExp进行蛋白诱导具有以下优势:1)表达量高,是传统IPTG法诱导量的数倍;2)操作简单,省却了对菌体浓度、IPTG用量及诱导时间的优化;3)重复性好,不同批次的蛋白诱导情况稳定。
4.适用范围
能用IPTG诱导蛋白表达的大肠杆菌菌株。
5.使用方法
7.附注
*本试剂仅供实验室研究使用
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文献和实验最近2个月都在做原核表达,刚开始什么都不会,连SDS-PAGE都跑成模糊的一片,其中的辛酸只有自己知道,现在实验慢慢上正轨了,自己也积累了一些经验。很怀恋之前探索的那段时光,现在把我做蛋白表达的过程和一些问题写出来,希望能够帮助开始做蛋白表达的人少走一些弯路。 1、表达载体的构建构建表达载体是比较简单的,不过也是需要对你的蛋白还有所用的载体有一个详细的认识,对于比较大的蛋白最好选用能够助溶的标签,但是也不是固定的,比如我的蛋白有65-70KD,我也用的也是HIS,上清也是有少量表达。最关键
。因此,一些商品化原核表达载体上设计有SD序列,以方便真核基因的表达。 原核细胞没有mRNA转录后加工的能力。因此,在原核细胞中表达真核基因时,应使用cDNA为目的基因。 原核细胞缺乏真核细胞对蛋白质进行翻译后加工的能力。如表达产物的功能和蛋白质的糖基化、高级结构的正确折叠有关,必须慎重使用原核表达系统。 外源基因在大肠杆菌中高效表达时,表达产物往往在胞浆聚集,形成均一密度的包涵体。包涵体的形成有利于保护表达产物不被胞内的蛋白酶降解,而且可以通过包涵体和胞内其他蛋白质密度
最近在做原核表达,包涵体。以前也做过,但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会,贴出来与大家共享,同时希望得到同行们的指正。 1. 首先介绍一下背景。载体是invitrogen公司的pET22b,Amp抗性。菌株是该公司的BL21 star DE3,是一个蛋白降解酶突变菌株,也就是说是一种优化表达菌株。 2. 第一次失败。第一次做诱导的时候,重复了很多次,但总是诱导不出来。PCR,酶切都正确。但没等测序结果出来就开始做了。失败了。曾在园子求助。后来证明是引物
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