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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
41
- 英文名:
Superoxide Assay Kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100次
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
产品名称:超氧化物检测试剂盒
英文名称:Superoxide Assay Kit
产品规格:100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是一种用于超氧化物快速高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒可以测定100个样品。
本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-1产生可溶性有色物质为基础来检测超氧化物。本试剂盒的检测试剂中添加了Catalase(触酶)等,可以清除过氧化氢等过氧化物对WST-1显色的干扰,使测定结果更加准确。并且本试剂盒还提供SOD(超氧化物歧化酶),可以验证本试剂盒测定出的结果是否为超氧化物,以排除检测体系中所用的一些试剂可能产生的干扰。对于本试剂盒,加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。
WST-1是一种类似于MTT的化合物,可以被超氧化物还原生成橙色的formazan。超氧化物产生越多越快,则颜色越深,即相应测定得到的吸光度值越大。
使用WST-1作为检测试剂比用传统的细胞色素c(cytochrome c)检测超氧化物具有多方面的优点。首先,WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450为0.02左右,因仪器和酶标板不同而有所不同),而细胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550为0.5左右),因此,使用WST-1与细胞色素c相比,检测灵敏度高很多倍。其次,WST-1的还原产物是稳定的可溶性产物,且对细胞基本无毒性,使WST-1方法更加适合于高通量的筛选。另外,细胞色素c法由于灵敏度的限制,一般不适合用96孔板测定,而WST-1法可以用96孔板测定,使检测更加便捷。用WST-1法或细胞色素c法对超氧化物测定效果比较参考图1。图1中,50万/毫升嗜中性粒细胞在37℃用PMA刺激指定时间,用WST-1或细胞色素c方法分别测定。WST-1法测定OD450,而细胞色素c法测定OD550。另外,WST-1法和luminol法相比,灵敏度相近,但仅须使用普通的酶标仪,无须使用luminol法所需的luminometer,并且检测速度也比luminol法更加快捷。
试剂盒组分:
超氧化物检测缓冲液————30ml
WST-1溶液—————————1ml
Catalase溶液———————200μl
SOD溶液——————————20μl
储存条件:-20℃,有效期一年。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
超氧化物检测试剂盒操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
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