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磷酸钙法细胞转染试剂盒

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  • 西格
  • XG-X11020
  • 进口、国产
  • 2025年07月12日
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      55

    • 英文名

      Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海西格

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      >200次

    磷酸钙法细胞转染试剂盒操作步骤:
    1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
    2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
    3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
    4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
    5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
    6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
    7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。本产品仅供科研活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
    8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
    9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率

    产品名称:磷酸钙法细胞转染试剂盒
    英文名称:Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

    产品规格:>200
    发货周期:13
    本试剂盒是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良,提高了转染效率,并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞,不仅可以瞬时表达,也可以筛选稳定株。本试剂盒足够转染不少于200个细胞样品。
    试剂盒组分:
    BBS溶液————————20ml
    氯化钙溶液———————20ml
    HEK293HEK293T细胞,即通常所谓的293细胞,是适合磷酸钙法转染的细胞之一,优化条件后转染效率可以高达90%以上;通常很容易达到40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染,但效率比293细胞要略低一些。
    本试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染,也适用于一些悬浮细胞的转染。本试剂盒提供的试剂都经无菌处理,可以直接使用。
    注意事项:
    1. 转染时,把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中,不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。
    2. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件,要确保A260/A280大于1.8,并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
    3. 在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳,二氧化碳的佳浓度为3%左右。
    4. BBS溶液的pH值直接关系到转染效率,尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中,以免被空气中的二氧化碳酸化。
    5. 转染时由于质粒不同、细胞不同,佳的质粒用量需自行摸索。
    储存条件:-20℃,有效期12个月。
    细胞生物学研究有以下几个方面:
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
    ②生物膜与细胞器的研究;
    ③细胞骨架体系的研究;
    ④细胞增殖及其调控;
    ⑤细胞分化及其调控;
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
    ⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
    细胞生物学研究的常用技术有哪些:
    1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
    2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
    3.细胞工程:细胞培养。
    具有显著特点:
    灵敏度高,数据可靠,重现性好
    操作简便,省时省力
    水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
    无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
    为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
    适合于高通量药物筛选
    细胞培养的优点:
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录本产品仅供科研
    采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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