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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
28
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
25ml×2/50ml×2/100ml×2/200ml×2/500ml×2
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。本产品仅供科研活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
产品名称:超敏ECL化学发光即用型底物1.0
英文名称:
产品规格:25ml×2/50ml×2/100ml×2/200ml×2/500ml×2
发货周期:1~3天
产品保存:4℃避光保存,一年有效。
产品规格:
100ml 工作液(可用于 10000cm2的膜)
溶液 A 500ml
溶液 B 500ml
产品说明:超敏 ECL 化学发光试剂盒,是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL)底物,可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应,发出荧光,从而可以通过用×光片压片或CCD 成像仪检测样品,当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规 ECL 底物无法检测的低丰度靶蛋白。
产品特点:
1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
2.使用适当的一抗和二抗时,可在 NC 膜或PVDF 膜上检测丰度为低皮克级的蛋白条带
3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
4.通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像
5.试剂盒组分能够在 4℃条件下稳定放置一年
7.配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测重要产品信息:好的免疫印迹结果需要优化实验条件,包括样品量,凝胶类型,转移方法,膜类型,封闭剂,洗涤缓冲液,一抗浓度,二抗浓度和孵育时间等。
1.为获得佳效果,在孵育步骤中使用摇床。
2.不要使用叠氮作为缓冲液的防腐剂,因为它会抑制 HRP。
3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹,这可能导致斑点和/或高背景。
4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。
5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号,所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。
6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时,避免使用牛奶作为阻断剂,因为牛奶含有不同量的内源性生物素,导致高背景信号。
7.使用足够量的洗涤缓冲液,封闭缓冲液,抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹并确保其永不变干。使用大的封闭和洗涤缓冲液体积可以使非特异性信号小化。
8.将 Tween-20洗涤剂(终浓度为0.05-0.1%)加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中,以减少非特异性信号。
注意事项:
1.A 液和 B 液吸取过程中必须更换移液器枪头,避免相互污染失效。
2.A 液和 B 液混合为工作液后,需避免强氧化剂如次酸钠等对工作液的影响。
3.须确保试剂瓶干净,无微生物或其它试剂污染。
4.为了您的安全,请穿实验服并佩戴一次性手套。
需要材料:
NC 膜或PVDF 膜
X 射线胶片或成像系统
摇床
洗涤缓冲液:含有 0.05-0.1%吐温 20的洗涤液,PBS:10mM 磷酸钠,150mM NaCl,pH7.2 TBS:10mM Tris,150mM NaCl,pH7.4
细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录本产品仅供科研
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
以下是超敏ECL化学发光即用型底物1.0的相关产品:
CD3D Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3d / CD3 delta 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿瑞吡坦;阿瑞匹坦质量规格:>98%;NK1受体拮抗剂Aprepitant
大鼠脉络膜血管细胞完全培养基 100mL泰诺福韦;替诺福韦质量规格:>98%,BRTenofovir
Raw-Blue小鼠单核细胞白血病细胞 Monocytic leukemia cells of Raw-Blue mice DMEM+10% FBS,不能加双抗+200μg/ml Zeocin泰诺福韦;替诺福韦(标准品)质量规格:HPLC≥99%,标准品Tenofovir
IL36G Protein Human 重组人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169)阿那曲唑质量规格:度> 99%,BR,可用于细胞培养Anastrozole
NCI-H838(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 Hep G2(肝癌细胞)阿那曲唑(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Anastrozole
CD14 Others Human 人 CD14 人细胞裂解液 (阳性对照) Cupricoxide氧化铜250克AR,99%
小鼠小肠血管内皮细胞完全培养基 100mL流醋亚铈 CqRIUM TITcNIUM FLUORIDq 10420-29-6
Pig MSC猪骨髓间质干细胞 Pig MSC of porcine bone marrow mesenchymal stem cells DMEM低糖+10% FBS+glutamin1000ul盒装无菌带滤芯吸头shēng huà shì jì容量:保存:-20℃500U
IL6 Protein Rat 重组大鼠 IL6 / Ierleukin-6 蛋白L-TYROSINEL-酪酸美国药典级500G60-18-4RT
RM1(大鼠肌肉成纤维样细胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12未分化(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)(ABA)
非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1]4,4'-二硝基二苯(>99.0%(GC))质量规格:>99.0%(GC)4,4'-Dinitrodiphenyl Ether
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3 肝癌细胞,BEL-7404细胞 CEL细胞,鸡胚原代肝细胞3,4'-二氨基二苯(>97.0%(GC)(T))质量规格:>97.0%(GC)(T)3,4'-Diaminodiphenyl Ether
RBE, 人肝胆管癌细胞 Human1,4-二苯氧基苯(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)1,4-Diphenoxybenzene
CST2 Others Human 人 CST2 / Cystatin-2 / Cystatin-SA 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二羧基二苯(>98.0%(GC)(T))质量规格:>98.0%(GC)(T)4,4'-Dicarboxydiphenyl Ether
人羊膜间充质基质细胞HAMSC4-甲氧基-17β-雌二醇质量规格:美国进口4-Methoxy-17β-estradiol
超敏ECL化学发光即用型底物1.0CD63 Others Rat 大鼠 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人细胞裂解液 (阳性对照) L-谷酸二乙酯盐酸盐,英文名或英文缩写:H-Glu(OEt)-OEtoHCl,级别:特,98.0%,规格:5克
人海马趾星形胶质细胞总RNAHA-h NA间溴拂本 3-Bromofluorobqnzqnq
盘羊皮肤细胞;ASHS3 卵巢细胞,Lec1细胞 L7712细胞,615小鼠T细胞性白血病瘤株NONIDETP-40SUBSTITUTENP-40 替代物试剂级无色至微黄色粘稠液体RTsigma
SV40T转化的人胚肾细胞;293TN-乙酰-L-谷酸,英文名或英文缩写:N-Acetyl-L-Glutamic acid,级别:BR,99%,规格:5克
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 81-64-11,4-二羟基醌;1,4-二羟基-9,10-二酮1,4-Dixy7noxyanthrainoneone;inoneizarin;C.I.58050
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文献和实验蛋白质免疫印迹(Western Blot )-底物化学发光 ECL 法
蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。与 Southern 或 Northern 杂交
检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测,我们通常使用碱性磷酸酶(AP)耦联的抗体,采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中,我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测,NBT/BCIP用于显色法检测。同时,对于膜杂交中的化学发光信号的检测,建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP
方法也不同,常用的检测系统有化学发光检测(ECL)和化学显色 DAB 检测系统。 化学发光检测(ECL): 利用 HRP 催化化学发光物质,生成一种不稳定的中间物质,其衰变时在暗室内形成明显的肉眼可见的化学发光带,利用 X 胶片感光 原理,将结果记录下来。 ECL 显色试剂配制:化学发光底物 A 和 B 按照 1:1 比例等体积混匀。 将混合好的显色底物覆盖印迹膜 1-5 min,黑暗条件下观察荧光效果。 在暗室可用放射自显影胶片或化学发光成像系统记录结果 。 如采用放射自显影胶片,曝光几秒
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