CEN6p（FITC）鱼探针/CEN6p（FITC）鱼探针/

如何做好 Southern 杂交？

加入：Labeling 5× buffer 10 μl（含有随机引物）dNTPmix 2 μl(含 dCTP、dGTP、dTTP 各 0.5 mM)BSA（小牛血清白蛋白）2 μl[ a -32 P]dATP 3μlKlenow 酶 5 U3. 将变性模板 DNA 加入到上管中，加 ddH2O 至 50 μl，混匀。室温或 37 ℃ 1 hr。4. 加 50 μl 终止缓冲液终止反应。标记后的探针可以直接使用或过柱纯化后使用。由于 a -32 P 的半衰期只有 14 天，所以标记好的探针应尽快使用。探针的比活性最好

FISH技术手册

位点也能较精确地确定下来。 二、显微镜及显微照相技术 荧光信号在高压汞灯的短波激发光下，常引起荧光信号发生淬灭，为防止淬灭的发生，需要将 DAPI 或 PI 稀释于 P － Phenlenediomine 的甘油缓冲液中。对于单拷贝探针的信号需要质量较好的荧光显微镜。如采用双色或多色滤光片可以同时观察 FITC 、 TEXAS － RED 等多种颜色的 FISH 信号。不论是染色体还是单拷贝基因的 FISH 信号均可用高度敏感和高分辨率的彩色胶片摄取，也可通过 CCD

荧光标记DNA探针在细胞核混悬液杂交中的应用

0.05%Tween –2%NGS,振荡，室温静置10min，加20 μl的羊抗小鼠–FITC荧光标记抗血清，稀释度1：100～1：300。孵育于37 ℃ 45 min，加1.25 ml PBS –Tween,室温静置10 min，离心，倾去上清液。 （6）生物素标记探针的荧光显示：加200 μl 4×SSC含0.1%Trion X-100 和5%BSA。室温静置10 min后，加20 μl抗生物素标记FITC抗血清15 μg/ml，孵育在37 ℃ 30 min，以1.5 ml 4×SSc –