脂质体2000/BR

HepG2转染的相关问题

0.25%的trypsin+0.02%EDTA消化细胞传代，弯头吸管稍加吹打，可使细胞分散的很均匀，消化的时间一定要掌握好，时间不够不易吹下且对细胞造成机械损伤，消化过了成片脱落，再想吹打成单细胞悬液就不容易了；4、根据脂质体介导细胞转染的原理，在质粒提取时要除去内毒素，否则会降低转染效率；5、对于转染时DNA和脂质体的量说明书上有个推荐的范围，DNA （μg）：Lipofectamine™； 2000 （μl）=1：0.5 ~ 1：5，可在此范围内设几个梯度摸索一下，从而找到最适比例；6、转染时用于

HepG2转染的方法讨论

1、lipofectamine 2000毒性比较大，所以建议转染6 h后换去转染培养基; 2、采用先铺板再转染的方式比采用同时转染的方式效率会高，但需根据实验需要设计，如果采用前种方式，细胞的汇合度一定要在80%以上再转染(说明书上好像是达到90%); 3、采用0.25%的trypsin+0.02%EDTA消化细胞传代，弯头吸管稍加吹打，可使细胞分散的很均匀，消化的时间一定要掌握好，时间不够不易吹下且对细胞造成机械损伤，消化过了成片脱落，再想吹打成单细胞悬液就不容易了; 4、根据脂质体

脂质体转染的几个实验方法

3) 转染准备：用2ml不含血清培养基漂洗2次，再加入1ml不含血清培养基。 4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养基中，摇匀，置37℃温箱中6-24h，吸除无血清转染液，换入正常培养基继续培养。 5) 其余处理：如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。 6) 注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。 2. 快速脂质体转染法操作步骤(方法二)： 1) 将细胞以5 x 105个/孔接种于6孔板中培养24