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- 2025年12月12日
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zFluor 647 琥珀酰亚胺酯
| 货号 | 1500 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 1 mg | ||
| Ex (nm) | 646 | Em (nm) | 668 |
| 分子量 | 853.04 | 溶剂 | DMSO |
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
zFluor 647 琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，与市场上其他类似波长染料相比，我们开发的zFluor 系列染料在给定波长下具有可能最高的光稳定性。zFluor 647具有与流行的Cy5®（GE Healthcare）和AlexaFluor®647（ThermoFisher）几乎相同的光谱特性。其高热和光稳定性使其成为单分子检测应用和高分辨率显微镜（如PALM，dSTORM和STED）的理想选择。在相同的测试条件下，zFluor 647具有比Cy5®和AlexaFluor®647高得多的臭氧稳定性，使其成为微阵列和其他生物芯片应用的更好选择。此外，zFluor 标记的寡核苷酸和多肽比AlexaFluor®647和Cy5®标记的更亮，更光稳。该特征对于荧光原位杂交（FISH）非常有用。它在633 nm的He-Ne激光器，氪的647 nm线处受到很好的激发。 -Ion激光器或发射650 nm的二极管激光器。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的zFluor 647 琥珀酰亚胺酯。
产品说明书
染色样本分析
操作步骤
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。
3.确定佳染料/蛋白质比例（可选）：
注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 - 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。
3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。
4.运行结合反应：
4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。
注意：溶液B /溶液的佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。
4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
5.纯化缀合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。
5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。
5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。
5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 - 蛋白质缀合物的级分。
注1：立即使用时，染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
注2：对于长期储存，染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥
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文献和实验偶联物，最大限度的提高了信噪比。图2. CF染料的超强特异性；由于AF染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团，容易非特异性结合正电基团，请看AF790 Dye与CF790的条带特异性对比。3. 优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像Alexa Fluor® dyes,DyLight? dyes and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如： AlexaFluor® 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯
4. 激光器 Kr/Ar激光器: 477nm, 488nm, 568nm, 647nm Ar激光器(UV): 361nm 激光器的特点: 1) 方向性好: 激光基本眼直线传播 2) 单色性好 l=10-8nm 3) 高亮度: 激光方向性好,其在空间上的能量分布是高度集中的 4) 偏振性: 激光为平面偏振光, 光纤耦合 5. 四个荧光通道, 一个透射光通道, 即除了可同时采集 多标记荧
。如共聚焦激光扫描显微镜(Bio-Rad 1024，美国Bio-Rad公司产品)采用氪/氩离子激光器，激发波长为488nm，568nm，647nm，可激发多种荧光探针。 （2）荧光探针的光稳定性和光漂白性：在进行荧光定量和动态荧光监测时，要求荧光探针有较高的光稳定性，也可通过减少激光扫描次数或降低激光强度的方法，来减轻光漂白的程度。但在进行膜流动性或细胞间通讯检测时则需要荧光探针既有一定的光稳定性又要有一定的光漂白性。 （3）荧光的定性或定量：仅做荧光定性或仅是观察荧光动态变化时，选择单波
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