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- SHBio
- 进口
- SHC4518
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
SHCC
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
| 产品名称： | KM933 |
|---|---|
| 商品货号： | SHC-1473 |
| 中文名称： | 病毒转化的人B淋巴细胞 |
| 细胞数量： | 1*10^6 |
| 组织来源： | B淋巴；EBV转化 |
| 细胞种属： | 人 |
| 生长特性： | 悬浮 |
| 细胞污染： | HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。 |
| 培养基： | 1640，90%；FBS，10%；双抗。 |
| 传代方法： | Maintain cultures at a cell concentraion between between 1 X 10(5) and 1 X 10(6) viable cells/ml. |
| 培养条件： | Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 细胞传代步骤： | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
| 复苏细胞步骤： | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞冻存步骤： | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 细胞冻存： | Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 细胞运输： | 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输（T25细胞瓶） |
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文献和实验1．血液制备：柠檬酸（Citric Acide）或肝素抗凝取血1～2ml，分装入管中，每管0.5ml全血，置于4℃冰箱中30分钟。 2．EBV病毒转化：从液氮中取出冻存的0.5ml全血，在37℃水中迅速解冻。 3．将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合，2500 rpm离心2分钟，弃上清，用含20％的胎牛血清、青、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640生长培养基重悬细胞。 4．加入0.3～
细胞10万～30万。待细胞生长进入指数增生期时，向培养瓶中加入致癌剂MNNG。致癌剂量1～3微克/毫升营养液。在37℃温箱中培养12～48小时。 4．低血清培养：弃掉MNNG作用液，用温PBS洗1～3次，加入含20%小牛血清，继续置温箱中培养2～3周，然后改用含5%血清培养液培养。低血清培养液不利于正常细胞生长，但已转化的细胞仍能增殖和形成转化灶。 5．转化灶形成和分离：在成功情况下，用致癌物处理过的细胞于10天后在正常细胞之间，可产生数量不等的转化灶。 2）病毒转化细胞 1．血液制备
国家人类基因组北方研究中心 对外开展重组腺病毒构建包装服务 通过与美国Vector Biolab公司合作，国家人类基因组北方研究中心（北京诺赛基因组研究中心有限公司）利用优越的实验条件和训练有素的科研人员，成功构建的一个集克隆、包装、扩增、纯化为一体的重组腺病毒构建技术平台。从2005年7月成立腺病毒小组并开展实验至今，为课题组内部完成包装200多个腺病毒，为Vector Biolab公司成功包装近300个腺病毒，并且进入美国市场。 本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒
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