37348-94-0/两性电解质

三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白

、5 mmol/L K2CO3、1.25% SDS、5% DTT、6% Triton X-100、2% 两性电解质（ ampholines)  pH 3.5~9.5，以双蒸水配制。K2CO3 可以配制成 2.8%(m/V ) 、SDS 配制成 10% ( m/V ) (过滤）、Triton X-100配制成 20% 的贮存液，加入其他成分和 3 ml 双蒸水直到尿素溶解（可加热至 30°C 以下，见注释 2) 。配制好的溶液可以分装保存在 -80°C 条件下数月。 2.5 蛋白质浓度测定 溶解

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

剂Triton X－100和NP－40常用来防止膜蛋白的聚集，所以上样前一定要离心以除去不溶解的颗粒；b，样品中残存核酸，可以采用多种方法去除核酸污染，如酸抽提、盐沉淀、核酸酶消化等；c，蛋白质修饰，非超纯级的尿素中的异氰酸盐污染物可能导致蛋白质的氨甲酰化，预电泳可以去除异氰酸盐，蛋白质样品处理或储存不当会发生包括Cys残基氧化，Asn或Gln残基去氨基化等修饰过程；d，波浪形条带常由于样品中盐浓度过高，有时候载体两性电解质或电极液不纯或电极不洁净也会产生波浪形条带；e，电极同凝胶连接不平行，配置凝胶

等电聚焦注意事项

1.等电聚焦后可用一根染色的细线（0.1mm）标出染料前沿的位置；2.不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别，使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异，若要获得最好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌；3.通常，窄范围的pH梯度可以提高分辨率，但是需要时间也比较常，pH梯度范围为2是较好的选择；4.由于电源和凝胶冷却系统的限制，最长的凝胶长度为8－10cm，实际上，分别电泳几块不同的pH梯度的凝胶比只电泳一块较长凝胶效果更好；5.当等电聚焦电泳时间很长时候（〉3000