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RayBiotech
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96T
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文献和实验ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书,可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期,保证所有试剂按说明书上的建议正确保存; 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象,如沉淀或变色等; 3. 底物溶液应为无色; 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液(样品、标准品及其他试剂)时,及时更换枪头,避免交叉污染; 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致; 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步,检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X 轴上为标准品浓度,Y 轴为对应的 OD 值)。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下: 第一步: 输入 OD 值
的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与 4个生物素分子结合,因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原)。在LAB 中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中





