红细胞裂解液

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  • 2025年11月22日
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      诺博莱德

    红细胞裂解液
    红细胞裂解液是一种去除红细胞最简便易行的方法,即用裂解液裂解红细胞,它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞(仅限于哺乳动物外周血)。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
    保存条件:2-8℃保存。
    主要成分:NH4Cl,NaHCO3和EDTA。
    本产品经无菌过滤。

    使用说明
    从全血中得到白细胞:
    1,红细胞裂解液冰箱预冷,新鲜抗凝血或者冻存抗凝血,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入红细胞裂解液混匀。
    2,800-1000rpm离心3-5分钟,离心弃去上层红色液体。
    3,收集沉淀部分,再加入原血等体积的红细胞裂解液,用去尖吸头轻轻吹打起来。
    4,800-1000rpm离心3-5分钟,离心弃去上清。
    5,如果沉淀还有红色,可重复步骤2和3。
    6,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次。
    7,重悬细胞,用于培养实验。如想提取RNA,最好只裂解一次,立刻进入下一步实验。而想提取DNA,可以裂解两三次。直接进入下一步实验。
    组织细胞样品:
    1.新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液。
    2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入3-5ml裂解液),轻轻吹打混匀。
    3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液。
    4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次。
    5.如裂解不完全可重复步骤2和3。
    6.重悬细胞,用于后续实验。如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液中进行。
    注意事项
    1.本产品经无菌处理,请在洁净台内进行操作。
    2.为获得最佳的裂解效果,加入裂解液混匀后可置冰浴中放置3-5分钟。
    3.裂解的所有步骤都可在冰上或4℃进行。
    4.为了您的健康和安全,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    N0110 红细胞裂解液 NobleRyder 100ml/500ml 60.00/200.00
    C0300 Hoechst 33258染色液 NobleRyder 50ml 298.00
    C0320 Hoechst 33342染色液 NobleRyder 50ml 298.00
    Hoechst 33258染色液
    Hoechst 33258,也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C25H24N6O·3HCl,分子量为533.88,CAS Number 23491-45-4。
    Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。
    Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。
    Hoechst 33258的最大激发波长为346nm,最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后,最大激发波长为352nm,最大发射波长为461nm。
    试剂盒组成 规格 保存条件
    Hoechst 33258浓缩液(50X) 1ml -20℃避光
    Hoechst 33258稀释液 50ml 2-8℃
    此染色液做成浓缩液和稀释液主要是为了使用方便,因为浓缩液才1ml,解冻起来很快,实际也可以一次将浓缩液都加入稀释液中,混匀使用。但如果一次使用量比较少,使用次数比较多,最好是适当分装一下,免得多次冻融。
    使用说明:
    Hoechst 33258染色液染色液的配制:将Hoechst 33258浓缩液取出解冻,轻轻混匀,短时间离心,根据使用量,按照1ml33258稀释液加入20ul33258浓缩液的比例配制,即成Hoechst 33258染色液。此配好的染色液深度为10ug/ml,如果感觉染色颜色比较深,可适当的稀释(用稀释液)。此配好的染色液未用完可存放于-20℃避光。
    1. 对于固定的细胞或组织:
    a. 对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
    b. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量Hoechst 33258染色液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3-5分钟。
    c. 吸除Hoechst 33258染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
    d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
    2. 对于活细胞或组织:
    a. 加入适当量Hoechst 33258染色液,必须充分覆盖住待染色的样品,通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液,对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
    b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液,用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
    红细胞裂解液 NobleRyder 100ml/500ml 60.00/200.00
    Hoechst 33258染色液 NobleRyder 50ml 298.00
    Hoechst 33342染色液 NobleRyder 50ml 298.00

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