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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Mouse Anti-human IgG/APC
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
详见说明书
产品参数:
| 产品名称 | APC标记的小鼠抗人IgG |
| 英文名称 | Mouse Anti-human IgG/APC |
| 货号 | BH-DB9121 |
英文名称:Mouse Anti-human IgG/APC
应用: Flow-Cyt=1:100-1000;IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
蛋白分子量: 160kDa
纯化方法: affinity purified by Protein A
公司产品仅供科研注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤:
公司产品仅供科研根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验人抗磷脂酰胆碱抗体IgG(APC-IgG)酶联免疫分析(ELISA)
抗原的微孔中依次加入抗磷脂酰胆碱抗体 IgG(APC-IgG) ,再与 HRP 标记的抗磷脂酰胆碱抗体 IgG(APC-IgG) 抗原结合,形成抗原 - 抗体 - 酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗磷脂酰胆碱抗体 IgG(APC-IgG) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中人抗磷脂酰胆碱抗体 IgG(APC-IgG) 浓度。
问:各位大侠能不能告诉我碱性磷酸酯酶标记的蛋白A和IgG二者在elisa中有何区别!它们的实验效果有什么不同?答;是有所不同的,前者是运用蛋白A与抗体(可以是各种可与抗原反应免疫球蛋白)的fc'片断进行非特异性的结合而起到代替二抗的效果。而IgG是针对一抗(主要是某一特定的与抗原反应的Ig,可能会因为轻链的相同的产生交叉反应)的抗抗体,其反应是特异性的。因而在实验中要根据你的需要来做选择,前者是不能很好的区分Ig的种类,而后者可以。这在疾病诊断中是很有意义的。
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