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抗荧光衰退封片剂(含DAPI)

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  • 2025年07月16日
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      10ml

    产品简介: 1. 抗荧光衰减封片剂以高纯度甘油为基础,内含抗荧光淬灭剂,有强烈的抗荧光衰减作用,用于对荧光组织和细胞样品的封片。样品封片后4ºC或-20ºC避光保存2-3周,可最大限度延长荧光持续时间和维持荧光发光强度,同时封片剂中的其它成分有助于保持组织抗原抗体处于结合状态。本试剂操作简单,在封片时用枪滴一滴抗荧光淬灭封片液,盖上盖玻片即可。 2. 抗荧光衰减封片剂内含DAPI即4'6-二脒基-2-苯基吲哚(4'6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。分子式为C16H15N5·2HCl ,分子量为350.25 ,CAS Number 28718-90-3。 3. DAPI可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ,且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。 DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm, DAPI和双链DNA结合后,最大激发波长为360nm,最大发射波长为460nm

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      纸吸干爬片上的液体,用抗荧光淬灭剂的封片液封片,在荧光显微镜下观察采集图像。

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      PBST, 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min,共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中孵育1h后,回收二抗,接着用PBST洗3次,每次5 min;由于荧光容易淬灭,故从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都要避光。  6. 复染核(定位的关键) 在玻片上滴加DAPI,并注意避光孵育5min,对标本进行染核,然后用PBST洗3次,每次5min,洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体,用抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察

    • DAPI染色

      ;(2)DAPI工作液室温染色5~20分钟(可根据实验材料的染色结果而定);(3)PBS漂洗;(4)水溶性封片剂封片,游离细胞也可直接用DAPI的PBS封片;(5)荧光显微镜观察。结果:正常的细胞核呈强荧光,细胞质无荧光;固定的组织细胞同样处理,亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光,在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters),腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。

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