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- 2025年12月22日
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上海谷研
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作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
BplI (5 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
产品名称：BplI (5 U/µL)
Enzyme:BplI
保存温度:-20℃
货期:2-3天
CompatibleBuffer:10xBufferTango
OptimalReactionTemperature:37°C
SensitivetoHeatInactivation::Yes
MethylationSensitivity:NotCpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
ThermoScientificBplIrestrictionenzymerecognizes^(8/13)GAG(N)5CTC(13/8)^sitesandcutsbestat37°CinTango(+SAM)buffer.SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.Note:AlsoavailableasaFastDigestenzymeforrapidDNAdigestion.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:BplIrequiresonlyMg2+foritsactivity,butisstimulatedbyS-adenosylmethionine.0.05?mMS-adenosylmethioninegivesmorethana100-foldincreaseinBplIactivity.Still,completecleavageofsomesubstrateswithBplIisdifficulttoachieve.BplIconcentrationisdeterminedbythemaximumcleavagelevelachievedwhennochangeinthefragmentationpatternisobservedwithfurtherenzymeincrease.Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
NACAgarMedium
胰蛋白胨胆盐琼脂 Tryptone Bile Agar 用于大肠杆菌的膜过滤法选择性培养(ISO标准)
胰膘肉汤基础 Tryptose Broth Base 100 用于肺炎链球菌、布鲁氏菌属细菌的培养
沙氏琼脂培养基250g/瓶用于真菌计数培养incubationmedia沙氏琼脂培养基250g/瓶用于真菌计数培养
O157显色培养基 1000ml 用于O157菌的显色培养，O157菌显亮红色、淡红色或红色
IL2RG Others Mouse 小鼠 IL2RG 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H004人肺大静脉内皮细胞完全培养基100mL
SUSD4 Others Human 人 SUSD4 / Sushi domain-coaining 人细胞裂解液 (阳性对照)
DU145细胞，人前列腺癌细胞 人癌细胞,LCC1细胞 间充质干细胞培养基MSCM-acf-prf
婆罗门牛皮肤成纤维样细胞;BOS-4
原代软骨细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml
Ligustroflavone 260413-62-5 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Schaftoside 51938-32-0 质量规格：HPLC≥98%，标准品
9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob 483-15-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Tangeretin 481-53-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Tangeretin 481-53-8 质量规格：HPLC≥98%,BR
Berberine hydrogen sulphate 633-66-9 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthiazone 212701-97-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthiside 866366-86-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Raddeanoside R8 124961-61-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
无 96315-53-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Prosapogenin CP6 72629-76-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Crovatin 142409-09-4 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Croverin 76475-17-7 质量规格：HPLC≥98%，标准品
levatin 140670-84-4 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthatin 26791-73-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
BplI (5 U/µL)羊10kDa干扰素γ诱导蛋白酶联免疫试剂盒
英文名称:Sheep CXCL10/IP-10 ELISA Kit
反应性:Sheep
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:25-1600 pg/ml
灵敏度:5 pg/ml
检测目标:CXCL10/IP-10
应用:Sandwich ELISA
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
BplI (5 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
产品名称：BplI (5 U/µL)
Enzyme:BplI
保存温度:-20℃
货期:2-3天
CompatibleBuffer:10xBufferTango
OptimalReactionTemperature:37°C
SensitivetoHeatInactivation::Yes
MethylationSensitivity:NotCpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
ThermoScientificBplIrestrictionenzymerecognizes^(8/13)GAG(N)5CTC(13/8)^sitesandcutsbestat37°CinTango(+SAM)buffer.SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.Note:AlsoavailableasaFastDigestenzymeforrapidDNAdigestion.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:BplIrequiresonlyMg2+foritsactivity,butisstimulatedbyS-adenosylmethionine.0.05?mMS-adenosylmethioninegivesmorethana100-foldincreaseinBplIactivity.Still,completecleavageofsomesubstrateswithBplIisdifficulttoachieve.BplIconcentrationisdeterminedbythemaximumcleavagelevelachievedwhennochangeinthefragmentationpatternisobservedwithfurtherenzymeincrease.Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
NACAgarMedium
胰蛋白胨胆盐琼脂 Tryptone Bile Agar 用于大肠杆菌的膜过滤法选择性培养(ISO标准)
胰膘肉汤基础 Tryptose Broth Base 100 用于肺炎链球菌、布鲁氏菌属细菌的培养
沙氏琼脂培养基250g/瓶用于真菌计数培养incubationmedia沙氏琼脂培养基250g/瓶用于真菌计数培养
O157显色培养基 1000ml 用于O157菌的显色培养，O157菌显亮红色、淡红色或红色
IL2RG Others Mouse 小鼠 IL2RG 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H004人肺大静脉内皮细胞完全培养基100mL
SUSD4 Others Human 人 SUSD4 / Sushi domain-coaining 人细胞裂解液 (阳性对照)
DU145细胞，人前列腺癌细胞 人癌细胞,LCC1细胞 间充质干细胞培养基MSCM-acf-prf
婆罗门牛皮肤成纤维样细胞;BOS-4
原代软骨细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml
Ligustroflavone 260413-62-5 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Schaftoside 51938-32-0 质量规格：HPLC≥98%，标准品
9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob 483-15-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Tangeretin 481-53-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Tangeretin 481-53-8 质量规格：HPLC≥98%,BR
Berberine hydrogen sulphate 633-66-9 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthiazone 212701-97-8 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthiside 866366-86-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Raddeanoside R8 124961-61-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
无 96315-53-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Prosapogenin CP6 72629-76-6 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Crovatin 142409-09-4 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Croverin 76475-17-7 质量规格：HPLC≥98%，标准品
levatin 140670-84-4 质量规格：HPLC≥98%，标准品
Xanthatin 26791-73-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
BplI (5 U/µL)羊10kDa干扰素γ诱导蛋白酶联免疫试剂盒
英文名称:Sheep CXCL10/IP-10 ELISA Kit
反应性:Sheep
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:25-1600 pg/ml
灵敏度:5 pg/ml
检测目标:CXCL10/IP-10
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验相关实验
Single Primer ("Semi-Random") P
to about 1 ng/µL 3 µL "T/TS" @ 0.4 u Taq/µL -------- 30 µL Cycle as follows: 30"x94°C 20 cycles 0"x94°C 0"x55°C 1'x72° S=9 30 cycles 0"x94°C 0"x40°C 1'x72° S=6 30 cycles 0"x94°C 0"x55°C 1'x72° S=9 Clean up: Add 1 µL ExoI
x PCR reaction buffer, 1.6 µl 4dNTP mix (250 pmol/µl), 2 µl T12 MN primer, 2 µl arbitrary primer (decamer), 0.2 µl Taq DNA polymerase (5 U/µl) use the PCR conditions as under section III. run PCR product on a 1.5 % agarose gel
Single tube confirmation PCR protocol
. For example, add 5 µl of the Zymo solution from isolate #1 to PCR tubes 1-5, 5 µl of the Zymo solution from isolate #2 to PCR tubes 6-10 and so on. - Make a PCR master mix by combining: 638 µl water, 110 µl 10 x Taq Buffer, 11 µl NTP's, and 11 µl Taq
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