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- 2025年08月25日
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深圳子科生物
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500ml
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文献和实验核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。Bolton等1962年设计了第一种简单的固相杂交方法，称为DNA-琼脂技术。变性DNA固定在琼脂中，DNA不能复性，但能与其它互补核酸序列杂交。典型的反应是用放射性标记的短DAN或RNA分子与胶中DNA杂交过夜，然后将胶置于柱中进行漂洗，去除游离探针，在高温、低盐条件下将结合的探针洗脱，洗脱液的放射性与结合
一、基本原理 是指运用寡核苷酸等探针检测细胞和组织的RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知RNA核苷酸片段，近核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的Mrna、rRNA 和tRNA分子。 RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有： （1）使用的探针不同：RNA原位杂交中多采用RNA或寡核苷酸探针，特异性更强
一、地高辛（Dig）标记DNA探针在石蜡切片上的检测方法 1. 组织切片的预处理 （1）固定：组织以10%中性福尔马林液，常规石蜡包埋，切片厚4-6 μm，最好用硅化玻，60℃烤片6-8 h。 （2）脱蜡至酒精。 （3）入0.2 mmol/L HCl 20 min 去除蛋白。 （4）50℃2×SSC，含5 mmol/L EDTA溶液中30 min。 （5）蛋白酶K（1 μg/ml 溶于0.1 mol/L PBS中），37℃20-25 min。 （6）0.2
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