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27
- 英文名:
Anti-PCNA Monoclonal Antibody
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
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详见说明书
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瓶
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3-Amino-2-naphthoic
产品名称:Anti-PCNA Monoclonal Antibody
宿主: Mouse
别名: ATLD2;cb16;Cyclin;HGCN872;MGC8367
应用: WB IP ICC IHC
稀释比例: WB 1:1000. ICC 1:100.
蛋白分子量: 29kDa
Gene ID: 5111
保存: Store at -20°C. Avoid freeze / thaw cycles.
储存液: Buffer: PBS with 0.02% sodium azide, 50% glycerol, pH7.3.
纯化方法: Fractional precipitation
亚型: IgG2b
免疫原: Purified recombinant human PCNA protein fragments expressed in E.coli.
性状: 液体
Public Immunogen Range: Purified recombinant human PCNA protein fragments expressed in E.coli.
Subcellular Locations: Nucleus
Swiss Prot: P12004
克隆号: 2E1-G10-H10
克隆类型: Monoclonal Antibody
| 产品名称 | Anti-PCNA Monoclonal Antibody |
| 英文名称 | Anti-PCNA Monoclonal Antibody |
| 货号 | BH-DB6983 |
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验指仅对一种抗原决定基的纯粹的抗体。这类抗体不可能通过将抗原 胞的 Hybridoma,在试管内制成了纯粹的单克隆抗体。用某种抗原使动物产生免疫感应,对应于抗原之不同部分可制成各种不同的抗体复合体。然而,因为一个产生抗体的细胞,只能产生一种抗体,所以骨髓肿瘤细胞与产生抗体细胞间的细胞杂种,可形成边产生抗体边增殖的 hybridoma,将每个杂种细胞进行克隆(无性繁殖系)培养,则一个克隆的细胞群只由单种类产生同一抗体的细胞所组成,这样得到的就是单克隆抗体。此抗体在测定
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