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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
31
- 英文名:
Poly-L-Lysine
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
瓶
产品名称:多聚-L-赖氨酸(15-30万)(进口)
有效期 2年
溶解性 10 mg/mL in water
英文名称 Poly-L-Lysine
CAS 25988-63-0
分子量 150,000-300,000
储存条件 -20℃
外观(性状) 白色冻干粉末或纤维状
单位 支
Poly-L-lysine聚合物可用于促进细胞粘附到固体基质,用于科研实验。
原理:
多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂,该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。培养瓶表面的性质对于细胞培养至关重要,细胞表面的糖蛋白(阴性)易于吸附在亲水性的表面上,因而细胞培养表面如果有相当含量的阳性电荷更能促进细胞吸附,这正是运用多聚赖氨酸优化细胞培养表面的重要所在。
| 产品名称 | 多聚-L-赖氨酸(15-30万)(进口) |
| 英文名称 | Poly-L-Lysine |
| 货号 | BH-DB6665 |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)的配制、保存、使用总结
,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。 我们这里的老师说,多聚赖氨酸不能用紫外线照射。 1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时,应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ; 2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低,我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20-30ug/ml; 3.包被时间一般为6-7h,或者过夜也可; 4.使用时应该先用灭菌水洗三次+PBS(起平衡盐作用)洗一次,洗液的量应该大于包被液的量; 5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长
。 我们这里的老师说,多聚赖氨酸不能用紫外线照射。 1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时,应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ; 2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低,我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20-30ug/ml; 3.包被时间一般为6-7h,或者过夜也可; 4.使用时应该先用灭菌水洗三次+PBS(起平衡盐作用)洗一次,洗液的量应该大于包被液的量; 5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长
。 如果你做免疫组化 ,需要放小的玻片到孔内,就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。 问:PLL的分子量有3-5万,7-15万,15-30万几种,应怎样选择??谢谢:) 答:我们养神经细胞,用的是分子量3万到7万的pll 。 以PBS配成1mg/ml的母液,-20度保存。使用时,用高纯度的蒸馏水稀释成0.11mg/ml的使用浓度,过滤除菌,以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面,室温下静置5min,吸除多余液体,股风吹干即可
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