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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
29
- 英文名：
BCIP/NBT Chromogen Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
-20℃，避光，有效期6个月
- 规格：
瓶
英文名称 BCIP/NBT Chromogen Kit
储存条件 -20℃，避光，有效期6个月
单位 盒
产品简介：
NBT即氯化硝基四氮唑兰 (Nitroblue tetrazolium chloride)，为深蓝色无定形微溶物质。BCIP即 5-溴-4-氯-3- 吲哚基-磷酸盐(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate), 在碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）的催化作用下，
BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的沉淀。
使用说明：
1. 取 40ul 25×NBT 加入到 1ml 1×AP 反应缓冲液中，混匀后，再加入 40ul 25×BCIP 混匀，即配成反应工 作液，此反应液最好现配现用。 注意：根据膜的大小，1×AP 反应缓冲液、25×BCIP、25×NBT 的量可以等比例扩大。
2. 把经洗涤的 PVDF/NC 膜浸入反应工作液中，于室温平缓摇动进行温育。
3. 当蛋白带的颜色深度达到要求（一般约 20-30 分钟）时，把膜浸入去离子水中停止反应。
产品参数：
| 产品名称 | BCIP/NBT显色试剂盒 |
| 英文名称 | BCIP/NBT Chromogen Kit |
| 货号 | BH-DB6663 |
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验） 曝光或是图像设备采集。由于其同样具有持续的发光过程，因此也可以进行多次曝光。在尼龙膜上使用CSPD或CDP-Star底物的杂交，还可进行探针的拨离和重探。 NBT/BCIP 使用类似NBT/BCIP显色底物的好处就在于，检测的过程中不需要X胶片，既可以使用尼龙膜也可以是使用硝化纤维素膜。然而，如果想要获得高灵敏度的检测结果，可能就需要较长的时间了（几个小时）。这种方法也有其不足之处：首先这种方法只能一次性获得信号
mM TrisCl 6.057g Chromogenic solution 33ulNBT solution 33ulBCIP solution 10ml alkaline phosphatese buffer NBT solution:0.1g NBT in 10ml 70% N,N-dimethylformamide BCIP solution:0.5g BCIP in 10ml N,N-dimethylformamide Alkaline Phosphatese buffer 1L
DETECTION OF ß-GALACTOSIDASE AND ALKALINE PHOSPHATASE ACTIVITIES IN TISSUE
immediately before using. Stocks X-Phos (100X):10mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate (also referred to as BCIP) in H20. Store in the dark as aliquots at -200 C. Can be frozen and thawed several times. NBT (50X):50 mg/ml nitro
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