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- BH-DB6637
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- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
43
- 英文名：
Ampholine pH6-9
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
瓶
产品参数：
| 产品名称 | 两性电解质pH6-9 |
| 英文名称 | Ampholine pH6-9 |
| 货号 | BH-DB6637 |
有效期 2年
别名 两性电解质pH6-9
英文名称 Ampholine pH6-9
CAS 37348-90-4
储存条件 2-8℃
单位 瓶
生物缓冲剂，生化试剂。
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验1 载体两性电解质必需具备的条件 （i）在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。 （ii）在等电点必需的足够高电导，以便使一定的电流通过，而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数，使整个体系中的电导均匀，如果有局部电导过小，就会产生极大的电位降，从而其他部分电压就会太小，以致不能保持梯度，也不能使应聚焦的成分进行电迁移，达到聚焦。 （iii）分子量要小，便于与被分离的高分子物质
载体两性电解质必备的条件：1.可溶性要好，为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移，载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。2.紫外吸收低，不发荧光。由于制备分离时，检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度，因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低。3.在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。4.在等电点必需的足够高电导，以便使一定的电流通过，而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数，使整个
度，已成为蛋白质特别是复杂体系中的蛋白质检测和分析的一种强有力的生化手段。 【实验器材和试剂】 1、凝胶原液（28.38%Acr +1.62%Bis）。 2、TEMED原液。 3、过硫酸铵。 4、pH3.5～10、pH4～6、pH6～8两性电解质载体。 5、尿素。 6、10%非离子去污剂NP-40。 7、50mmol/L NaOH
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