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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
瓶
单位 盒
产品简介
暗盒是一种在避光条件下进行信号收集的工具，在暗室中操作，将胶片压入暗盒，能很好的固定膜和胶片的相对位置。让膜上的信号很好的反映在胶片上。是暗室曝光（western）中很好的帮手。
使用方法
第一步，信号源（膜）的放置：将用发光液孵育过的膜放置在暗盒的中间位置，将一层透明薄膜覆盖在膜上；
第二步，调试适当的红外光强度，将暗室中其它的灯光关闭，使暗室中只存在红外光，在红外光的条件下取出胶片，裁剪合适大小，做好标示，正压在膜上，然后盖上暗盒，计时。
第三步，取出暗盒中的胶片进行显影等操作。
产品参数：
| 产品名称 | 暗盒 8*10 |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB6615 |
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验性检测仪探测膜上的放射强度。实践证明，当放射强度指示数值较环境背景高 1~2 倍时，是洗膜的终止点。上述洗膜过程无论在哪一步达到终点，都必须停止洗膜。洗完的膜浸入 2× SSC 中 2 min，取出膜，用滤纸吸干膜表面的水份，并用保鲜膜包裹，注意保鲜膜与 NC 膜之间不能有气泡。将膜正面向上，放入暗盒中（加双侧增感屏），在暗室的红光下，贴覆两张 X 光片，每一片都用透明胶带固定，合上暗盒，置 -70 ℃ 低温冰箱中曝光。根据信号强弱决定曝光时间，一般在 1-3 天时间。洗片时，先洗一张 X 光片，若感光偏
（Dipping）过核乳胶膜的载片放入暗盒内，事先最好将暗盒准备好，为保持干燥，放入一包变色硅胶干燥剂（无水干燥剂为小块蓝色晶体，吸水后呈粉红色，置烤箱中烘干待转成蓝色后可重复应用），预先备好封固暗盒用的胶带备用。 ②核乳胶液，国外产品为ILFord K5乳胶液，国内核乳胶产品可自原子能研究所订购。不论国产或进口乳胶，事先应（按说明需要浓度）稀释分装在10ml小瓶内，密封于暗盒内，4℃备用。反复的冷冻和融解核乳胶会增加背景染色。每一小瓶供一次性实验应用。 为节省核乳胶
漂洗后，把杂交膜放在一张3MM 滤纸 上稍晾干后，将潮湿的滤膜封在塑料袋内或用塑料薄膜包裹。 15． 滤膜放射自显影：将杂交膜（包裹在塑料袋内，RNA面朝上）放在X射线暗盒底部， 胶片 放在其上。为方便起见，可将增感屏固定在暗盒盖上，关闭暗盒，在－70℃曝光1天～2周。 16． 将暗盒从冰箱内移出时，应有足够的时间（30min～1h）使其温度调至平衡。在暗室将 胶片 从暗盒取出，并在自动X线底片处理仪上冲
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