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- BH-DB6607
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
Bind-Silane
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
RT,有效期1年
- 规格：
瓶
| 产品名称 | 亲和硅烷 |
| 英文名称 | Bind-Silane |
| 货号 | BH-DB6607 |
别名 Bind-Silane
英文名称 Bind-Silane
储存条件 RT,有效期1年
单位 ml
制备聚凝胶时，玻璃板可以先用1M的NaOH浸泡一段时间，再用洗涤剂清洗一遍，用水洗掉洗涤剂，再用去离子水冲洗干净，最后用乙醇擦拭玻璃板。
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
免疫球蛋白：
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操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验及试剂 1.电泳仪，垂直电泳槽及其附件，玻璃板，常用实验器材等。 2.玻璃板处理试剂： (1) KOH/甲醇溶液：5gKOH溶于100ml甲醇中，用于清洗玻璃板。 (2) 95%乙醇 (3) 亲和硅烷溶液：95%乙醇 4ml 冰乙酸 20ul 亲和硅烷 20ul (4) 玻璃硅烷：用移液器取适量于短板上，用无尘擦拭纸涂抹均匀。 2.丙烯酰胺溶液45% 丙烯酰胺：43.4克
，7 mol/L 尿素，2% ( W/V ) DTT，4% ( W/V ) CHAPS，2% IPG 缓冲液，pH 3~10 NL，少量溴酚蓝。 ( 10 ) 矿物油。 ( 11 ) 乙醇。 ( 12 ) 冰醋酸 ( 13 ) 亲和硅烷和剥离硅烷。 ( 14 ) 亲和硅烷工作液：8 ml 乙醇，200 μl 冰醋酸，1.8 ml Mlli-Q 超纯水，10 μl 亲和硅烷。 ( 15 ) 40% 丙烯酰胺储液（40% 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺 37
； （2）用1～5V/cm的电压，待溴芬蓝和二甲苯氰FF迁移到适当距离后停止电泳； （3）在紫外检测仪下检测扩增产物，记录电泳结果并照相。 2.7 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 2.7.1 测序凝胶板的制备 玻璃板的处理：银染测序的玻璃板一定要非常清洁。实验过程中，先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高。每次铺胶前均需分别严格处理长玻璃板和短玻璃板。 （1）长玻璃板的处理 a) 用浸透亲和硅烷溶液
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