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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Western Blocking Buffer
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
2-8℃,有效期1个月
- 规格:
瓶
英文名称 Western Blocking Buffer
储存条件 2-8℃,有效期1个月
产品简介:
Western Blot 膜封闭液(Blocking Buffer)适用于 Western Blot 实验中 PVDF 膜或 NC 膜等转印膜的封闭。封 闭后,可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比,以达到理想的显色效果。 按照每张膜封闭需要 5-10 毫升封闭液计算,一个包装的 Western 封闭液可以封闭 10-20 张膜。
使用方法:
本产品为即用型,无需稀释。蛋白转膜后将转印膜置于容器中,加入足够量的膜封闭液充分覆盖膜,室 温下振荡封闭半小时至 1 小时,即完成膜的封闭,然后进行一抗孵育等后续操作。
产品参数:
| 产品名称 | 膜封闭液 |
| 英文名称 | Western Blocking Buffer |
| 货号 | BH-DB6564 |
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤:
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验商品名称 规格 数量 单价 0.5ml离心管 1000支/包 1 180.00 1.5 ml离心管 500支/包 1 100.00 2.0 ml离心管 500支/包 1 110.00 非变性裂解液 100ml 1 160.00 ECL超敏发光液 25ml 1 160.00 WB膜封闭液 50ml 1 40.00 考马斯亮蓝G-250 10g 1 130.00 甘氨酸 500g 1 78.00 丽春红s 10g 1
%脱脂奶粉或BSA (室温孵育1 h) p western blot 膜封闭液(生物试剂公司) p Tween-20的作用:Tween-20是一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力。在做westen blot时,用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。Tween 这种非离子型去污剂在乳化蛋白时,不破坏蛋白的结构,可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。 封闭剂选择
%脱脂奶粉或BSA (室温孵育1 h) p western blot 膜封闭液(生物试剂公司) p Tween-20的作用:Tween-20是一种非离子型去污剂,有复性抗原 的作用,可提高特异性的识别能力。在做westen blot时,用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。Tween 这种非离子型去污剂在乳化蛋白时,不破坏蛋白的结构,可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。 封闭
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