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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
38
- 英文名:
Prestained Protein Marker(3.3kD-31.0kD)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
-20℃,有效期1年
- 规格:
瓶
英文名称 Prestained Protein Marker(3.3kD-31.0kD)
储存条件 -20℃,有效期1年
产品简介
本产品包含预染的3种多肽和2种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3. 3kD-31. 0kD。可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经Tricine-甘油SDS-PAGE凝胶电泳时以及转移到PVDF或NC膜上可看到清晰的5条蓝色的蛋白条带。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉,每种预染蛋白含量约为40μg,配有一支1×上样缓冲液。
使用说明:
1. 开封后,溶于200 μ1 1×上样缓冲液,可根据需要进行小量分装,每管10 μl,-20℃贮存,每次取一管使用,避免反复冻融。
2. 使用前取分装后的小管室温融化后即可上样电泳。
产品参数:
| 产品名称 | 预染超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-31.0kD) |
| 英文名称 | Prestained Protein Marker(3.3kD-31.0kD) |
| 货号 | BH-DB6552 |
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤:
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
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温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验相关专题 蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量
蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化
或重组的纯化蛋白混合物组成。在凝胶或膜上显示其位置需要染色步骤。预染标准允许在电泳过程中监测蛋白分离,也可以在随后的印迹步骤中指示转移效率。然而,它们比较昂贵且加入染料会影响蛋白迁移率。预染标准在确定分子量时可能 不够精确,并且蛋白质上附加的染料在转移时会影响它们吸附到膜上的能力。 聚丙烯酰胺浓度 凝胶中聚丙烯酰胺浓度可以是均一浓度或是梯度浓度。最常见的聚丙烯酰胺浓度为10%,最适合分离10-150KD范围内的蛋白质。若要分析未知蛋白或许要更宽的分离范围,推荐使用梯度
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