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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存：
33
- 英文名：
Coomassie Brilliant Blue Fast Staining solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
2-8℃保存，有效期1年。
- 规格：
瓶
别名 考马斯亮蓝染色液
英文名称 Coomassie Brilliant Blue Fast Staining solution
储存条件 2-8℃保存，有效期1年。
| 产品名称 | 考马斯亮蓝快速染色液 |
| 英文名称 | Coomassie Brilliant Blue Fast Staining solution |
| 货号 | BH-DB6547 |
货号：P1300
规格：500ml
组成：溶液A 10ml、溶液B 500ml。
保存：2-8℃保存，有效期1年。
产品简介：
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的染液，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色，染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带。
使用方法： 工作液的配制，取100ml溶液B，加入2ml溶液A，混匀，此为工作液。此工作液配好后请在一周内使用完，过期效果会有一定的影响。
1. 将电泳后的 PAGE 胶（以8cm×10 cm大小为例）取下放入容器中，加入50 ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止，（可选：继续在脱色摇床上摇动5 分钟），弃去水溶液。
2. 加入25ml 快速染色工作液，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动 5-10 分钟，弃去染色液（此时蛋白条带应已可见）。
3. 加入约50 ml水，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，换水即可完成脱色，观察结果。
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
以下是考马斯亮蓝快速染色液的相关产品：
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三颗针队照药材Threeneedleconolmedicine1g
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有关物质N-脱烷基171270-20100120mg
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87233-62-3 富马酸依美斯汀标准品 100mg
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23-xy7noxybetulin 84414-40-4
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赪桐Clerodendrum japonicum Cleroindicin B 4-羟基-4-(2-羟基乙基) 107389-91-3 C8H14O3 ≥95%
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固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约需2 g 左右的固体NaOH），溶解后定容至100 ml。（6）GUS酶提取液：0.1 M 磷酸缓冲液（pH7.0）取50 ml；10% SDS取1 ml； 0.5 M EDTA(pH8.0)取2 ml；Triton X-100取100 ul；β-巯基乙醇100 ul；用水定容至100 ml。（7）MUG底物：称8.8 mg MUG，溶于10 ml GUS酶提取液中，配制成2 mmol/L 的工作浓度。（8）反应终止液（0.2 mol/L Na
水研磨成匀浆，转移到 离心管 中，再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一 离心管 中，放置0.5~1h 以充分提取，然后在4 000r/min 离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL 容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。 （2）测定：另取2 支10mL 具塞 试管 ，按下表取样。吸取提取液0.1mL（做一重复），放入具塞刻度 试管 中，加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白
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