Western blotting 蛋白Marker

免疫球蛋白：

产品参数：
 

产品名称	Western blotting 蛋白Marker
英文名称	Western Blotting Marker
货号	BH-DB6545

产品名称：Western blotting 蛋白Marker
英文名称　Western Blotting Marker
储存条件　-20℃，有效期2年。避免反复冻融，建议分装保存。
单位　瓶
产品简介 :　
传统的Western Blot试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率，但预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断。Western Blot Marker是专门为Western Blot试验设计的分子量标准，由9种发光蛋白和9种预染蛋白组成；9种发光蛋白分别为23、30、36、44、50、62、90、120 和160KDa，这些蛋白均可与抗体结合，因此能与抗原在同一张膜上曝出信号，阳性信号可以直接通过Western Marker 的位置来判断；9种预染蛋白分别为15、25、35、40、55、70、100、130 和180KDa，其中70KDa为红色，其他为蓝色，转膜完毕后在膜上肉眼可见。　
使用说明:　
1. 取出后于室温放置融化；　
2. 温和地充分混匀，取 5μl 该 Western Blot Marker 至上样孔中，进行 SDS-PAGE 电泳。　
3. 电泳完毕后转至 PVDF 膜或 NC 膜，与一抗二抗孵育。　
4. 孵育完毕，将 Western Blot Marker 与抗原一起通过 ECL 曝光至胶片。
注意事项： 
 1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
 2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
 3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
 4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
    工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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