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文献和实验&Tag 技术混淆,CUT&Tag 技术在异染色质位点上有很好的结果,Henikoff 推荐的阳性对照就是存在于异染色质区域的 H3K27me3,且我们的客户在 H3K27me3 以及 H3K27AC 上都有很好的结果。 4. ConA beads 的作用是什么?如果没有 ConA beads ,能否用离心法代替? ConA beads 是经过 Concanavalin A(刀豆蛋白A,ConA)包被的磁珠。ConA 是一种从刀豆和豌豆等籽粒中提取出来的植物
[2] ✦ CUT&RUN 原理: 图 4:CUT&RUN 原理 [3] 利用连有刀豆蛋白 A 的磁珠(concanavalin A-coated magnetic beads)结合细胞。使用非离子去污剂洋地黄皂苷进行细胞膜通透。然后孵育靶蛋白(如转录因子, TF )的抗体和 Protein A-MNase 。抗体和 Protein A-MNase 能够通过核孔进入细胞核,MNase 通过 Protein A 和抗体的介导切割靶蛋白附近的 DNA 序列。 MNase 的活化需要 Ca
细胞激活剂 促细胞分裂剂 所 用 浓 度 应 答 细 胞 刀豆蛋白A ConA 1- 10 μg/ml T 淋巴细胞 植物凝集素PHA
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