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- 2025年07月12日
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- 库存：
40
- 英文名：
Streptavidin/Gold
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
| 产品名称 | 金标记链霉亲和素(10nm/15nm)规格 |
| 英文名称 | Streptavidin/Gold |
| 货号 | YS-D5335 |
英文名称: Streptavidin/Gold
应用: IEM=1:500-5W;IGS=1:500-5W;GICA=1:500-5W;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
使用方法：
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM；
(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量，具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项：
1、本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳;若想测定浓度，可入加少量SDS(1%)，煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
下列是金标记链霉亲和素(10nm/15nm)规格的相关产品：
植物应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒Solvent Red 48
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文献和实验体金溶液选用15000r/min 4℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。 （2）一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./L TBSpH8.2（内含1%BSA，0.05%叠氮钠）溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10%～30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心，分带收集不同大小颗粒的胶体金标记
细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。 (一)调整与超速离心法 (1)将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。 (2)一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./L TBSpH8.2(内含1%BSA，0.05%叠氮
袋中，两头扎紧，放入蔗糖或硅胶中浓缩，浓缩到原体积的1/10量，浓缩完毕后纯化。离心法纯化时，不要浓缩。 五、胶体金标记蛋白质的纯化 标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。 （一）调整与超速离心法 （1）将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4 ℃
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