链置换酶 Bst DNA Polymerase

Bst DNA Polymerase

链置换酶

 

◆产品说明

　　本产品具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性，是一款自动从模板双链DNA的氢键解离，然后后合成新DNA链的酶。由于其特性，耐热性链置换DNA聚合酶无需DNA的双链解离，即可在恒定温度下合成DNA，且合成不受DNA二级结构的抑制。

 

特点

●  具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性

●  可在恒定温度下合成DNA

●  适用于合成GC含量高的DNA链

●  合成不受DNA二级结构抑制

 

应用

●  利用链置换活性的应用（等温基因扩增法等）

 

 Bst DNA Polymerase

最佳反应温度	60°C～65°C
失活时间*1	80°C、5 min

*1 将酶原液直接热变性时的失活温度

 

来源	Geobacillus stearothermophilus
活性	8 units/μL
单位定义	1 unit指以小牛胸腺DNA为引物/模板，在65°C，30 min的条件下将10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物的酶量。
储存液成分	10 mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）, 1 mmol/L DTT, 0.1% Tween 20, 0.1 mmol/L EDTA, 50% Glycerol
酶反应条件	随酶附带10×的酶反应专用缓冲液（0.5 mL×1）。如反应总体积为50 μL，添加5 μL的酶反应专用缓冲液

 

◆产品组成

Bst DNA Polymerase（1,600 units）

产品组分	容量	保存
Bst DNA Polymerase（8 units/μL）	200 μL × 1	-20°C
10 × Bst Reaction Buffer（80 mmol/L Mg2+）	500 μL × 1	-20°C

 

◆应用实例

实验案例1  LAMP法中的运用

LAMP法 反应条件

3.0% Agarose 21   TAE凝胶电泳   EtBr染色     M：Gene Ladder Wide 1   1：A 公司Bst DNA Polymerase   2：本公司Bst DNA Polymerase

 

Candidatus Liberibacter asiaticus DNA	1 × 106 copies
FIP*	40 pmol
BIP*	40 pmol
F3 Primer*	5 pmol
B3 Primer*	5 pmol
Loop Primer F*	20 pmol
Loop Primer B*	20 pmol
dNTPs Mixture	1.4 mM each
10 × Bst Reaction Buffer	2.5 μL
Bst DNA Polymerase	8 units
Total	25 μL

反应

65°C

60 min

*引物序列

FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'

BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3'

F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'

B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'

Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'

Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'

 

实验案例2  RCA法评估Bst DNA Polymerase的耐热性与最佳反应温度

RCA法 反应溶液组成

M13mp18 single strand DNA	40 ng
Universal primer	50 mM
dNTPs Mixture	1.4 mM each
Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C)	20 mM
KCl	10 mM
(NH4)2SO4	10 mM
MgSO4	8 mM
Tween 20	0.10%
Betaine	0.8 M
Bst DNA Polymerase	4 units
Total	20 μL

反应条件

各个温度下

30 min

 

结果

条带

M： Gene Ladder Wide 1 (产品编号313-06961)

D： 模板 DNA (M13mp8 single strand, 产品编号319-00841)

 

引物序列（Universal Primer）

5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'

 

电泳条件

0.7% Agarose S / TAE凝胶电泳

EtBr染色

使用不含SDS的Loading Buffer

 

备注

　　本实验为比较两种Bst DNA Polymerase，使用相同的反应液组成进行反应。在RCA法中使用各种酶配套的专用缓冲液时，须进行预实验探究反应体系。

 

◆相关信息

备注

●  本产品为实验研究用试剂。不可作为医药品使用。

●  检测Candidatus Liberibacter asiaticus的LAMP引物组合是国立研究开发法人 农业、食品产业技术综合研究机构 九州冲绳农业研究中心灵活运用先进技术，在农林水产研究高度化事业“抑制顽固性疾病柑橘绿化病传播的技术开发”中开发的产品。

 

License

●  LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）法由荣研化学株式会社持有专利权。

 

◆产品列表

产品编号	产品名称	包装
311-07481	Bst DNA Polymerase	1600 units

 

◆相关产品

产品编号	产品名称	包装
319-07281	Csa DNA Polymerase	1600 units
319-07301	96-7 DNA Polymerase	1600 units
312-07271	dNTPs Mixture（25 mM each）	400 μL