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- Nippon Gene
- 311-07501
- 2025年10月21日
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AMV来源重组逆转录酶
AMV Reverse Transcriptase
本产品是来源于大肠杆菌表达的Avian Myeloblastosis Virus（AMV）的重组逆转录酶，酶活性高，能够高灵敏度地检测出RNA。
该酶在引物存在时，以单链RNA和单链DNA作为模板合成DNA。由于它具有解链活性和分解双链RNA-DNA中RNA的RNase H活性，因此可以高效地进行RT-PCR。可应用于first strand cDNA合成、制备cDNA探针、RT-PCR。
◆特点
● 高灵敏度检测RNA
● 长链RNA的逆转录
● 热稳定性高
● GC-rich RNA的逆转录
◆应用
● RT-LAMP法
● 合成first strand cDNA
● 制备cDNA探针
● 应用于RT-PCR
| 来源 |
Escherichia coli (Recombinant) |
| 活性 |
20 units/μL |
| 反应温度 |
42°C-65°C |
| 单位定义 |
1 unit指以poly(A)/(dT)15为模板/底物，在37°C，10 min的条件下将1 nmol 的脱氧核糖核苷酸摄入酸不溶性沉淀物中的活性 |
| 纯度试验 |
DNase试验、RNase试验 |
◆产品组成
AMV Reverse Transcriptase （500 units）
| 组成内容 |
包装 |
储存 |
备注 |
| AMV Reverse Transcriptase (20 units/μL) |
500 units × 1 |
-20°C |
200 mmol/L磷酸钙（pH 7.2，25°C），2 mmol/L DTT、0.2% Triton X-100, 50% Glycerol |
| 5xAMV RT Reaction Buffer |
1 mL× 1 |
-20°C |
250 mmol/LTris-HCl（pH 8.5，25°C）、150 mmol/LKCl, 40 mmol/L MgCl2 |
◆应用实例
实验案例 Isothermal Master Mix合用（高灵敏检测RNA）
用ISOGEN从感染瓜类褪绿黄化病毒（简称CCYV）的蜜瓜叶中提取RNA，将提取的RNA溶液作为模板使用。用等温基因扩增试剂Isothermal Master Mix和一组引物扩增目标区域，然后用等温扩增荧光检测装置Genie® II检测出了CCYV RNA。
<反应条件>
Isothermal Master Mix 15μL
AMV RT 0.25 units
引物 2.5μL
模板RNA 2μL
反应体积 25 μL
扩增： 63°C 30 min
※ 检测瓜类褪绿黄化病毒的引物为独立行政法人农业、食品产业技术综合研究机构九州冲绳农业研究中心在推进新农林水产政策的实用
※ 技术开发产业“开发以粉虱为媒介的新型瓜类蔬菜病毒病的综合性防治技术系统”中开发的产品。
结果
由于Isothermal Master Mix中含有的DNA聚合酶具有逆转录活性，即使不添加逆转录酶也能检测出RNA，但通过添加本产品，可提高检测速度。另外，模板RNA量为0.5 ng时也能使目标区域扩增（绿色实线）。
备注
本产品为实验研究用试剂。不可作为医药品使用。
◆产品列表
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| AMV Reverse Transcriptase |
500 units |
◆相关产品
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| 316-08151 |
GeneAce Reverse Transcriptase |
10,000 units |
| 312-08153 |
10,000 units × 5 |
|
| 313-08161 |
M-MLV Reverse Transcriptase |
10,000 units |
| 319-08163 |
10,000 units × 5 |
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文献和实验。因此，文库提供了关于特定细胞类型、器官或发育阶段的基因时空表达信息。cDNA 文库克隆可用于鉴定新型 RNA 转录物、测定基因序列和重组蛋白的表达。 构建 cDNA 文库的必要条件是 RNA 可适当代表其全长和/或相对丰度，因此，逆转录酶的选择非常重要。具有高持续合成能力的逆转录酶可以合成长 cDNA，并捕获低丰度 RNA。同样，在对具有高度二级结构的 RNA 进行逆转录时，建议使用热稳定性较强的逆转录酶。 cDNA 末端快速扩增（RACE） cDNA 末端快速扩增（RACE）是一种基于 PCR 的方法
，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNase A，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase。 使用无RNaseH活性（RNaseH-）的逆转录酶 逆转录酶催化RNA转化成cDNA。不管是M-MLV还是AMV，在本身的聚合酶活性之外，都具有内源RNaseH活性。RNaseH活性同聚
糖凝胶电泳，若胶图上只有 28sRNA、18sRNA 和 5.8sRNA 三条单一的条带，说明提取的 RNA 完整度良好。如果出现拖带的现象，表示 RNA 部分降解。2、若胶孔和 28sRNA 条带之间出现单一明亮的条带，表示可能有基因组 DNA 残留。3、若胶孔内出现条带，说明可能有蛋白等大分子物质残留。逆转录RNA 提取完成后，需要反转成 cDNA 才能进行后续实验，所以反转步骤是必不可少的。逆转录将从逆转录酶的选择和引物的选择进行介绍：逆转录酶的选择：常见代表性反转录酶有 AMV RTase 和 MMLV
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