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- 2025年10月28日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 库存：
38
- 英文名：
PCNA cell proliferation Detection Kit
- 保质期：
有效期一年
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
-20℃避光保存
- 规格：
详见说明书
英文名称：PCNA cell proliferation Detection Kit
产品规格：20T
发货周期：1～3天
PCNA 细胞增殖检测试剂盒（细胞免疫荧光法/流式细胞仪检测），PCNA是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。
操作方法
1. 在最适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul PCNA 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSAPBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgGFITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
注意事项：
PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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文献和实验【求助】关于β-catenin和细胞增殖的关系，急死了！！！
rainbubu 想研究β-catenin在某肿瘤中和细胞增殖和预后的关系，材料用存档的蜡块和冰冻，想用免疫组化来检测β-catenin的表达情况，然后想检测β-catenin的表达和细胞增殖的关系，能不能简单的看β-catenin和PCNA、ki-67之间的关系，有统计学意义就得出β-catenin和细胞增殖有相关性。 但是也不能说明细胞增殖就是β-catenin表达异常的结果啊 那么怎么才能说明β-catenin和细胞增殖的关系
CCK 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学名：2 -（2 - 甲氧基 - 4 - 硝苯基）- 3 -（4 - 硝苯基）- 5 -（2,4 - 二磺基苯）- 2H - 四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK 法与其它检测方法之间的比较
一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
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