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- 联迈生物
- LM-43012-1
- 中国/上海
- 2025年07月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%,含酚红)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
2-8℃避光保存。长期保存于-20℃避光。
- 规格：
100ml
细胞凋亡检测
细胞凋亡检测用途
1. 用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；
2. 应用于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗；
3. 对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
细胞凋亡检测方法
非常多样，根据具体情况可选用对应检测方法。以下每一种方法都有很详细的步骤说明，内容较多，此处就不一一列出，想了解详情，请点击「阅读原文」查看。
1. 荧光探针双标记法
2. 形态学检测法
3. DNA ladder 法
4. Annexin V/PI 双染色法
5. 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V 法）
6. TUNEL 法
7. Ca
spase-3 活性检测法
细胞增殖/毒性的注意事项
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。
酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。
当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1 mM的氯化亚铅、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话，将会100%抑制。
悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。
细胞周期检测
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数，研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如，已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。
测定原理：
① 待测细胞经 3H- 胸腺嘧啶核苷标记后，所有 S 期细胞均被标记。
② S 期细胞经 G2 期才进入 M 期，所以一段时间内 PLM = 0。
③ 开始出现标记 M 期细胞时，表示处于 S 期最后阶段的细胞，已渡过 G2 期，所以从 PLM = 0 到出现 PLM 的时间间隔为 G2期的持续时间。
④ S 期细胞逐渐进入 M 期，PLM 上升，到达到最高点的时候说明来自处于 S 最后阶段的细胞，已完成 M，进入 G1 期。所以从开始出现 M 到 PLM 达到最高点 (≈ 100%) 的时间间隔就是 M 期的持续时间。
⑤ 当 PLM 开始下降时，表明处于 S 期最初阶段的细胞也已进入 M 期，所以出现 LM 到 PLM 又开始下降的一段时间等于 S 期的持续时间。
细胞染色
常用的细胞染色方法有：
1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；
2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色以及番红复染四个过程；
3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；
4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；
5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
蛋白提取/检测
操作过程中
z 操作时总是小体积小量的操作，避免污染，并且动作要快
a：此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸。
b：此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巯基，-SH - ）。
c：此类蛋白酶在活性中心包含金属离子（如：Zn 2+ ，Ca 2+ ，Mn 2+ ）。
d：此类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。
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文献和实验问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没
动物细胞培养中Hanks液、D-Hanks液和消化液的配制方法
组织块则为0.1%或0.125%。 实验材料与用品： ***材料：3 000 mL锥形瓶，25 mL、50 mL试剂瓶，500 mL输液瓶，螺口盖，翻帽塞，pH试纸，孔径0.22μm的微孔滤膜。 ***药品：NaCl，Na2HP04，KH2P04，KCl，酚红，NaHC03，胰蛋白酶干粉，0.02%EDTA ，CaCl2，D-葡萄糖，MgCh·6H20，MgS04·7H20，酚红(0.1%)(配法：称酚红2 g，置于研磨器中，先用数滴5.6%的NaHCO3溶液溶解并研磨，再加
实验材料： 1. 细胞来源：新生儿包皮； 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液：两者比例为1：1，用D-Hanks液配制； 4. 0.02%大豆胰蛋白酶抑制剂：用DMEM培养液配制； 5. 生长基质：人纤维连接蛋白，按10μg/cm2 包被培养皿； 6. DMEM培养液：DMEM培养基，加10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100
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