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- 雅吉生物
- 6个月
- YS06745B
- 中国
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海雅吉生物
- 样本：
血清，血浆，尿液，组织
- 库存：
100
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
6个月
- 规格：
96T
人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)定性检测试剂盒（ELISA） 说明书
使用前，请务必仔细阅读说明书。
使用前，请务必仔细阅读说明书。
【产品名称】
通用名称：人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)定性检测试剂盒（ELISA）
【包装规格】
48 人份/盒，96 人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，定性检测血清、血浆、细胞培养上清液中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)
的浓度。
【检验原理】
本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体 (Flu A-H1N1 IgM)抗原的微孔酶标板中，加入人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)阴阳性性对照和待测样本，温育洗涤，再加入另一株 HRP 标记的抗人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体
-酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液
（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)的浓度正相关，通过计算公式判断样品阴阳性。
【主要组成成分】主要成分
| 组分 | 数量 | 主要成分 |
| 阴性对照 | 0.5ml/管 | 不含待测物的缓冲液 |
| 阳性对照 | 0.5ml/管 | 含待测物的缓冲液 |
| 包被微孔板 | 48T | 预包被固相抗原 |
| HRP 标记抗体 | 3mL | HRP 标记的检测抗体 |
| 样本稀释液 | 3mL | 缓冲液 |
| 底物液 A | 3mL | 过氧化工作液 |
| 底物液 B | 3mL | TMB 工作液 |
| 终止液 | 3mL | 硫酸稀释液 |
| 20×浓缩洗涤液 | 20mL | 含 0.15%Tween20 的 PBS |
| 说明书 | 1 份 | -- |
| 自封袋 | 1 个 | -- |
| 不干胶 | 2 片 | -- |
需要但未提供的材料及耗材
1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪。
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水或去离子水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、1L 量筒
7、无粉一次性乳胶手套
8、稀释用聚丙烯试管
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期 6 个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回 2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和 HRP 标记抗体，有效期为 28
天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如 Thermo MK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-
20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm 条件下离心 20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在 4000rpm 条件下，离心 20 分钟取上清， 血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本保存和稳定性
样本在 2-8℃条件下，可以储存 72h，或者在- 20℃储存 6 个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
【试剂准备】
1、使用前，所有的组分都要至少复温 30min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按 1:20 稀释，即 1 份的浓缩洗涤液，添加 19 份的蒸馏水。
3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 体积充分混合，混合后 15 分钟内使用。
操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，样本孔加待
测样本 50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 100μL。
6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。
8、如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
9、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育 15min。
10、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。
【检验结果的解释】
检测完成后，以阴性对照的 OD+0.25，做为阈值，样本 OD 值大于阈值，为阳性；样本
OD 值低于阈值为阴性。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于标准曲线最高浓度，请用检测缓冲液稀释样本，并重新检测。如果细胞培养上清样本需要较大的稀释倍数，请用细胞培养基进行适度稀释。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、阴性结果
阴性对照的 OD 值不高于 0.2。
3、阳性结果
阳性对照的 OD 值不低于 0.8。
4、特异性
本试剂盒识别天然和重组人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgM 抗体(Flu A-H1N1 IgM)，与结构类似物无交叉。
5、稳定性
2℃-8℃保存，有效期 6 个月。
【注意事项】生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有 proclin-300 防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
4、试剂盒中的终止液为酸性溶液，在使用终止液时，请佩戴防护服，及防护眼睛、手及面部的设施。
5、本试剂盒用于科学研究，不能用于诊断治疗。
6、请不要使用其他批号或其他来源的试剂替代本试剂盒中的试剂。
技术要点
1、重溶或者混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加标准品与样本时，每个标准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处 理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
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文献和实验相关实验
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