无菌冻存管，聚丙烯；高密度聚乙烯盖，5.0ml容量

细胞培养从头学——入门篇

1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4-H2O 1.56 g，KH2PO4 0. 2 g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1 000 ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。 2.移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。 （三）胰蛋白酶溶液的配制与消毒 胰蛋白酶的作用是使细胞

写给细胞小白的实用手册

灯进行整体消毒。长期未使用的细胞房在实验前需要用 20% 乙酸蒸 24 h。2. 二氧化碳培养箱消毒二氧化碳培养箱定期需要用 70% 乙醇擦拭托盘和内壁，同时使用手提紫外灯进行消毒。培养箱低端托盘的水也要为无菌水，并两周更换一次。3. 器皿灭菌、消毒玻璃器皿和螺口盖采用高压灭菌（121 ℃，100 kPa，20 min），玻璃器皿包括移液管、冻存瓶、盖玻片、载玻片、玻璃注射器、玻璃试管、吸管等。 螺口盖的盖子分为有內垫的金属或酚醛树脂盖、聚丙烯盖子、硅树脂盖子、白橡胶盖子。塑料器皿的消毒通常采用紫外

细胞培养的操作步骤

)，在冻存前1d换液。 （2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×107／ml左右密度，离心，去上清。 （3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。 （4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。 （5）旋好冻存管并仔细