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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
详见说明书
- CAS号：
详见说明书
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
4°C保存
- 规格：
100T/盒
产品名称 VR mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 人
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容:
1.VR寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
试剂盒组份：
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
产品具有以下优点：
1、原装进口抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高
3、先进的优化方案----重复性高，可靠性强
4、购买本公司的VR mRNA原位杂交试剂盒免费代测
5、技术服务要求：专业，规范，高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8、可检测指标齐全：炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，先进的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴。
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VR mRNA原位杂交试剂盒英文名称:Streptomyces sp.
中文名称链霉菌属
存储人:
来源历史:<< NTHU, K. C. Chen << NRRL
其他保藏中心编号:NRRLB-3559
分离来源:
菌种特性
备注：
氯霉素,葡萄糖异构酶,限制性内切酶sph l
培养条件：28°C
生物安全等级:1
氧气需求:
培养基:TSB培养基：36
POTATO DEXTROSE AGAR (PDA)
Diced potatoes 200.0 g
Glucose 20.0 g
Agar 15.0 g
Distilled water 1.0 L
Boil finely diced potatoes in 500 ml of water until thoroughly cooked, filter through cheesecloth and add water to filtrate to 1.0 L. The agar is dissolved in the filtrate by heating, and the glucose is added prior to sterilization.
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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文献和实验原位杂交法测定TNF的mRNA 原位杂交 【试剂及配制】 （1） TNF-DNA探针 （2） 地高辛标记液试剂盒 （3） 杂交液：60%去离子甲酰胺，300mmol/L NaCl、30mmol/L柠檬酸钠、10mmol/L EDTA 25mmol/L NaH2 PO4 (pH7.4)，5%葡聚糖硫酸酯，250μg/μl变性鲑精DNA （4） 设备：温箱，水浴
试剂盒 公司 型号 次数 价格 推荐指数 mRNA提取 生工 SK1411 10次 750 SK1412 20次 1100 mRNA提取 invi K1580-96 TAKARA 23006 6 rxns 7059 mTRAPTMMaxi 23506 5 x 6 rxns 30019
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