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瓶
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产品名称:兔抗马IgG-HRP
储存条件: -20°C
单位: 瓶
酶标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学的各个分支学科中的特异、敏感和安全的免疫化学制剂。目前较为常用的是将辣根过氧化物酶(HRP),经过钠氧化而标记在抗体IgG分子上,而制成HRP—抗体结合物。公司向用户提供的各类酶标物,均根据本公司建立的改良过钠氧化法标记而成。每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。产品的工作浓度根据方法不同而别,用前最好-20℃冻存,避免反复化冻。
应用范围:
抗原决定族的抗原性分析鉴定,各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
工作中易产生的问题:
1.包被抗体或抗原不适,易产生阳性值较小,或产生变异,即跳管现象。
3.封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
主要性能:
每支0.1ml液体,内含有HRP约200μg/支,IgG约含400μg/支,BSA300μg/支,-20℃保存,稳定一年。4℃保存约3~6个月,1:10稀释,4℃可30天左右。稀释液为:pH7.4PBST。
工作效价:
直接ELISA法:1:500~1:1000,用TMB作底物(OD450nm)P/N=2.5~3.0为阳性。
免疫印迹法:1:200~400,免疫组化:1:20~40,斑点免疫1:200~400。
备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
| 产品名称 | 兔抗马IgG-HRP |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB1189 |
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验β-hCG单抗 标记 100.00 羊抗HBsAg多抗 包被 160.00 鼠抗HBsAg单抗 标记 160.00 鼠抗HBeAg单抗 包被 200.00 鼠抗HBeAg单抗 标记 200.00 鼠抗甲胎蛋白单体 包被 200.00 鼠抗甲胎蛋白单体 标记 200.00 兔抗A族链球菌抗体 包被和标记 200.00 兔抗B族链球菌抗体 包被和标记 300.00 羊抗小鼠抗体 质控线 10.00 羊抗兔抗体 质控线或参考线 10.00 驴抗羊抗体 质控线或参考线 10.00 兔抗
和第3支空试管中,然后往第2支试管中加0.1ml抗HRP,往第3支试管中加0.1mg/ml HRP 0.1ml; 5. 混匀,在室温放1h后观察。如第2支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗原过量;如第2支试管中不产生沉淀,而第3支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗体过量; 6. 制备PAP时,HRP的浓度应选取抗原过量管的前一管。 [附注2] 兔(或羊)抗HRP的制备 1. 兔抗HRP的制备:取HRP1mg溶于生理盐水中,加弗氏完全佐剂1ml充分乳化
1材料和试剂:1.1.1包被液:碳酸盐缓冲液,PH9.61.1.2洗涤液:PBS-Tween20,PH7.41.1.3稀释液:0.5%BSA-PBS-Tween20,PH7.41.1.4底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液,PH5.01.1.5底物液:邻苯二胺8mg溶于底物缓冲液20ml,30%H2O230ul1.1.6终止液:1mol/LH2SO41.1.7兔抗大肠杆菌抗体1.1.8 HRP酶联兔抗大肠杆菌抗体1.1.9菌体蛋白标准:中国药品生物制品检定所提供,(10ug/ml)1.2. 仪器
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