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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 库存:
50
- 克隆性:
多克隆
- 保质期:
1年
- 保存条件:
4℃保存,一年有效,如长期不用请放置-20℃保存。
- 规格:
250mL
产品简介
Western Blot一抗二抗去除液(Stripping buffer) 可以充分去除结合在印迹膜上的一抗和二抗,使同一张膜可进行多次抗体检测,无需反复电泳和转膜,节省样品和时间,适用于使用 NC或 PVDF 膜进行 Western Blot 检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。
本品经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用3次,每次大约只需15-30min,并且在室温条件下就可以进行。
本公司生产的各类型Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
使用说明
1.在完成Western 化学发光检测后,用蒸馏水或TBST缓冲液漂洗5-10min。
2.弃蒸馏水,加入适量的Western 一抗二抗去除液(中性),至少需把膜完全覆盖。在摇床上室温缓慢漂洗 25min左右(漂洗时间应根据不同的目的蛋白来调整:比如内参抗体等表达量较高的蛋白,可以延长漂洗时间至30min)。
3.弃Western 一抗二抗去除液,用蒸馏水或TBST缓冲液洗膜3次,每次10min,室温振摇。
4.剥脱后的膜加入封闭液进行封闭,进行下一轮的 WB 实验。
注意事项
1、用辣根过氧化物酶(HRP),任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶,如果使用碱性磷酸酯酶,任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2、本Western一抗二抗去除液仅适用于PVDF膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。
3、使用ECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验llh刘丽华 请教高手我最近做western blot,结果总是不理想,目的条带总是很淡,上样量已经是60ug了,封闭用的是5%脱脂奶粉,我还应该怎么改进哦?下面是我的结果,采用的是ECL化学发光,凝胶成像系统拍照,下面一条是我的目的条带。 麻烦各位帮帮忙吧! Mostino 转膜应充分,并提高第一抗体的使用量! 成其瑞 用好点的抗体 volano
样本准备 蛋白提取 所需仪器:匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子,消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液:PMSF=100:1。 1) 组织处理:首先用酒精棉消毒剪刀和镊子,取适量的组织于匀浆器中,用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。(含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆) 2) 细胞处理: A、 贴壁细胞处理:去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好:我做了1个多月western blot了,内参跑得还可以,但是目的蛋白总是跑不好,今天跑出来非特异性条带很清楚,而目的条带却很淡,不知是什么原因!前一次也是这种情况,我就延长封闭时间至2h,一抗1:700,二抗1:5000,请各位高手帮忙分析一下吧!下面是我的图片,最下面,模糊的一条(靠图片中间的一条)是我的目的条带! coffeeshine 如果非特异带很清楚,延长封闭时间没作用
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