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30
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Human Cystatin 7 ELISA KIT
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详见说明书
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上海博湖
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详见说明书
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瓶
产品名称：Human Cystatin 7 ELISA KIT
英文名称:Human Cystatin 7 ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:117 pg/ml
检测目标:Cystatin 7 / CST7
应用:Sandwich ELISA
| 产品名称 | Human Cystatin 7 ELISA KIT |
| 英文名称 | Human Cystatin 7 ELISA KIT |
| 货号 | BH-DB615 |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验相关实验
有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法：1， TORCH及传染病试剂盒（间接法），见2.2.32， TORCH-IgM捕获法特色：包被抗体，标记抗原原理：3， 细胞因子试剂盒采用的方法路线（ABC-ELISA）原理产品特色：采用ABC法，灵敏度更高，特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的，使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
的原理用于分子诊断方面：TrimGen公司的KRAS Mutation Detection Kit在96孔板里一次能实现7/8个KRAS突变位点的检测。 另外基于相同原理的技术还有PPT-ELISA。这是用来筛截短突变的，相关文章见：1，Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA . 2，An ELISA-based high throughput protein truncation test
时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。2、样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量，排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式比较固定
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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