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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Lowry Protein Assay Kit
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
BSA 蛋白标准品 4℃保存有效期至少 3 个月,-20℃保存有效期至少一年,其他试剂室温保存有效期至少一年。试剂开封使用后请及时密闭保存,Folin 酚乙试剂颜色变成深绿色即失效。
- 规格:
500T;1000T
Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将 Folin 试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5~500μg/ml 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
试剂组分
| 组分 | 500T | 1000T |
| Folin酚甲试剂 A | 100ml | 100ml×2 |
| Folin酚甲试剂 B | 5ml | 5ml |
| Folin酚乙试剂(1N) | 10ml | 20ml |
| PBS稀释液 | 30ml | 30ml |
| BSA蛋白标准品 (5mg/ml ) | 1ml | 1ml |
操作说明(以1000T为例)
1.根据需要量,取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合,混合后有效期为 24 小时,过期失效。
2.根据需要量,取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释稀释 10 倍至浓度 0.5mg/ml。若采用酶标仪法(96 孔)
3.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中,加 PBS 补足到 20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度),加 20ul 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
5.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入 200ul,轻轻震动,混匀,室温放置 10 分钟。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙试剂,迅速混匀,37℃放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。
若采用分光光度计法(接上述步骤 2)
3.取八支(或者更多)5ml 离心管,标号,按下表加入试剂。
4.混匀,37℃放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7(样品管1) | 8(样品管2) | 9(样品管 3) |
| 标准蛋白BSA | 0μl | 40μl | 80μl | 120μl | 160μl | 200μl | 200μl适当稀释的样品1 | 200μl适当稀释的样品2 | …… |
| 稀释液(PBS) | 200μl | 160μl | 120μl | 80μl | 40μl | 0μl | 0μl | 0μl | 0μl |
| Folin酚甲试剂 | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
| 混匀,室温放置10分钟 | |||||||||
| Folin酚乙试剂 | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl | 200μl |
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文献和实验的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。 Folin―酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳
色深度与蛋白的量成正比。Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯
[目的] 掌握Lowry法测定蛋白质浓度的原理。 [原理] 蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu 2+ 螯合,形成蛋白质一铜复合物,此复合物使酚 试剂 的磷钼酸还原,产生蓝色化合物,在一定条件下,利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。 [操作] 取试管7支、编号、按下表操作
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