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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
IPTG Solution (50mg/ml)
- 保质期:
有效期至少12个月。
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
冰袋运输,-20℃保存,有效期至少12个月。
- 规格:
5mL
配置方法
50mg/ml IPTG 5 ml:取250 mg IPTG,溶于5 ml无菌水中,过滤除菌后-20℃贮存。
20mg/ml X-Gal 5 ml:取100 mg X-gal,溶于5 ml 二甲基甲酰胺(DMF),棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。
操作方法
1、转化平板的制备: 向铺好的含有相应抗生素的固体琼脂平板表面加入16 µl的IPTG(50 mg/ml)、40 µl的X-gal (20 mg/ml),使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开,尽量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺挥发 干净。
2、转化
(1)取部分连接产物加到50-100 µl感受态细胞中(感受态细胞应刚从-70℃冰箱取出放 于冰浴上,待刚刚解冻时加入连接产物,连接产物的加入量不超过感受态细胞体积的十分之 一),轻弹混匀,冰浴30分钟。
(2)将离心管置于精确42℃水浴90秒,取出管后立即置于冰浴中放置2-3分钟,其间不 要摇动离心管。
(3)向离心管中加入250-500 µl 37℃预热的SOC或LB(不含抗生素)培养基,150rpm,37℃ 振荡培养45分钟。此步目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
(4)将离心管中的菌液混匀,吸取100 μl加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基 上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
3、检测
将得到的白色菌落接种 1-5 ml LB 培养基,37℃摇床振荡培养过夜,保存菌种后提取质 粒,应用 PCR 或酶切方法鉴定插入
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