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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
57
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
| 产品名称 | ELISA终止液价格 |
| 英文名称 | 详见说明书 |
| 货号 | YS-D3249 |
别名:ELISA Stop Solution
储存条件:RT,有效期:1年
外观（性状）液体
单位:瓶
本品用于ELISA（酶联免疫吸附实验）中显色反应的终止。
操作说明：
在ELISA实验过程中，酶标板中加入TMB显色至预期深浅后，加入50ul的ELISA终止液终止反应，30分钟内在450nm处测定吸光值。
使用方法：
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM；
(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量，具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项：
1、本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳;若想测定浓度，可入加少量SDS(1%)，煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
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文献和实验ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书，可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期，保证所有试剂按说明书上的建议正确保存； 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象，如沉淀或变色等； 3. 底物溶液应为无色； 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液（样品、标准品及其他试剂）时，及时更换枪头，避免交叉污染； 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致； 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X 轴上为标准品浓度，Y 轴为对应的 OD 值）。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下： 第一步: 输入 OD 值
一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中
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