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60
- 英文名:
详见说明书
- CAS号:
详见说明书
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
4°C保存
- 规格:
100T/盒
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
参数规格:
产品名称 alpha-synuclein mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 大鼠
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容: 1.alpha-synuclein寡核苷酸探针杂交液 2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品具有以下优点:
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Anti-CHCHD3 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-HOXB7 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C9H6O4性状:Yellow powder纯度:98.5%
Anti-CHCHD5 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-RPLP2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C15H14O4性状:Powder纯度:98.0%
Anti-CHD1 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-SLC22A2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C11H10O5性状:Powder纯度:98.5%
Anti-CHD2 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-CFLAR Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C24H24O5性状:Yellow powder纯度:%
Anti-CHD2 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-SLC41A2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C21H22O7性状:Powder纯度:%
Anti-CHD3 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-SART1 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C24H26O7性状:Powder纯度:%
Anti-CHD3 Polyclonal Antibody英文名称: Anti-CD207 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C19H20O5性状:Oil纯度:97.0%
Anti-CHD3(C-term) Monoclonal Antibody英文名称: Anti-NFATC3 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C21H22O7性状:Powder纯度:98.0%
alpha-synuclein mRNA原位杂交试剂盒Cytochalasin D特异性: 大鼠Gastrin receptor mRNA原位杂交试剂盒
4,R-ajmalicine N-oxide特异性: 人、大鼠、小鼠GAT-1 mRNA原位杂交试剂盒
Vasicinone特异性: 人、大鼠、小鼠GAT-2 mRNA原位杂交试剂盒
1-Hydroxycanthin-6-one特异性: 人、大鼠、小鼠GAT-3 mRNA原位杂交试剂盒
Thymidine特异性: 人、大鼠、小鼠GATA-2 mRNA原位杂交试剂盒
Crenatine特异性: 人、大鼠、小鼠GATA-3 mRNA原位杂交试剂盒
Harmine特异性: 人、大鼠、小鼠GATA-5 mRNA原位杂交试剂盒
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