免疫组化SP法检测试剂盒(山羊IgG)价格

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：免疫组化SP法检测试剂盒(山羊IgG)价格
英文名称：SP Kit(Goat)
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为山羊IgG的免疫组化实验DAB显色。本试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片为例）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚
 a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
 b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
 c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-兔抗山羊IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素标记兔抗山羊IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-兔抗山羊IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl20×DAB显色液A，加入50μl20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%TritonX-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01—0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
免疫组化SP法检测试剂盒(山羊IgG)价格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Acid blue 1食品蓝31克生物技术级，90%
Acid alizarin blue B媒染蓝B1克ACS级
ACHE酰胆酯酶100克生物技术级，200 u/mg,末
ACH酰溴化胆5克3N，200目
Acetylsalicylic acid阿司匹林10克14400～97400，体,即用型,6条带
Acetylene tetrabromide对称四溴5克CP，99%
Acetyl tributyl citrate酰柠檬酯三酯1克2.5N，99.5%
Acetyl CoA酰辅酶A盐25克BR，50u/mg
Acetoximeβ-异亚1克LR，96%
Acetophenone100克色标，99%
AcetoacetanilideN-酰酰5克BR，28%
AcetanilideN-酰5克CP
Acetamide酰500克试剂级
Acetaldoxime亚胲5毫升AR，99%
ACESN-酰50毫克FMP，90%
免疫组化SP法检测试剂盒(山羊IgG)价格MefloquineHydrochlorideDynamitin/DCTN2动力蛋白激活蛋白2抗体ELISAKitforPhospholipaseA2,Cytosolic(cPLA2)
MefloquineRelatedCompoundAEB2/Endbindingprotein2微管相关末端结合蛋白2抗体ELISAKitforMelatonin(MT)
MegestrolAcetateINSC有丝分裂相关蛋白INSC抗体ELISAKitforCrossLinkedC-TelopeptideOfTypeICollagen(CTXI)
Meglumine(AS)CENPF有丝分裂着丝粒蛋白F抗体ELISAKitforGlucokinase(GCK)
Mad2L2有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2抗体ELISAKitforHomingAssociatedCellAdhesionMolecule(HCAM)
MelengestrolAcetateNUDC细胞核分离C蛋白抗体ELISAKitforAmyloidBetaPeptide1-42(Ab1-42)
phospho-NUDC(Ser326)化细胞核分离C蛋白抗体ELISAKitforAmyloidBetaPeptide1-42(Ab1-42)
NUP160核孔蛋白NUP160抗体ELISAKitforAmyloidBetaPeptide1-42(Ab1-42)
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。