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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
40
- 英文名：
RIPA Lysis Buffer For Western Blot
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好
英文名称：RIPA Lysis Buffer For Western Blot
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
对目的蛋白进行检测分析时，总蛋白的提取至关重要，如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败，如信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液，才能最大程度地保证后续实验的成功。而RIPALysisBufferForWesternBlot对动物组织和细胞的裂解能力极强，它可以完全裂解细胞核和线粒体，并可提取到更多的膜蛋白，从而可获得更多的总蛋白。因其超强的裂解能力，使得大量的基因组DNA从细胞核中释放出来，使蛋白变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶(货号MT0068)消化可有效解决。经我司RIPA裂解液获得得蛋白可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度；使用Bradford法测定由本裂解液裂解所得到样品的蛋白浓度会稍有误差。
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)
产品特点
1．可以很好的裂解细胞膜及细胞核，从而更好的完全释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白。
2．对于核蛋白，经本品裂解后，核蛋白与粘稠的基因组DNA分离，离心后核蛋白存在于上清中，核蛋白的捕获率高达90%。
3．对于膜蛋白，WesternBlotRIPALysisBuffer可最大程度的破坏细胞膜和变性蛋白，使蛋白与膜分离，防止蛋白与膜复合物在离心后沉淀，从而防止蛋白丢失。
4．在提取蛋白过程中，基因组DNA释放使得蛋白提取液变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。
储存条件置于室温阴凉处，可保存2年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
D-(+)-Gluconic acid δ-lactone葡萄糖内酯100毫克BR，90%
D-(+)-Galacturonic acid右旋水解糖2KU高，
D（+）-ArabitolD-树胶糖5KU高，
D-(-)Salicin柳1克BR，97%，a型
Cytosine4--2-羟嘧250UBR，99%
Cytochrome C细胞血素C100克BR，0.5u/mg
Cytochalasin B松胞菌素B1公斤BR，600u/mg，猪胰
Cytisine野靛5克BR
Cytidine胞嘧核苷7.5KUBR，
Cys-GlyH-半胱-甘-OH100克BR，
CyDTA反-1,2-二-N,N,N',N'-四25克BR，97%，油状
Cyclosporin A环孢A100毫克BR，2ml/支
Cyclopentanone oxime环肟100毫克CP，
Cyclopentanol羟环500克AR，99%
Cyclooctanone环辛25克BR，97%
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好D-缬酯盐盐LovastatinPRRSV M protein 猪蓝耳病病M蛋白抗体OMgp-Ab ELISA Kit 小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体小鼠白介16(IL-16)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产β-酯盐盐Formononetin特价供应CPN10 叶绿体伴侣蛋白抗体（苹）(Ntn1)ELISA Kit 大鼠轴突生长诱向子1大鼠白介16(IL-16)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-天冬二酯盐盐Pseudoginsenoside- F11现货促销FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病LZM (Rabbit Lysozyme) ELISA Kit 兔溶菌酶鸡白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-天冬-β-酯盐盐Ginsenoside Rb1特价促销Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) /瘦肉抗体IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit β干扰白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好
英文名称：RIPA Lysis Buffer For Western Blot
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
对目的蛋白进行检测分析时，总蛋白的提取至关重要，如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败，如信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液，才能最大程度地保证后续实验的成功。而RIPALysisBufferForWesternBlot对动物组织和细胞的裂解能力极强，它可以完全裂解细胞核和线粒体，并可提取到更多的膜蛋白，从而可获得更多的总蛋白。因其超强的裂解能力，使得大量的基因组DNA从细胞核中释放出来，使蛋白变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶(货号MT0068)消化可有效解决。经我司RIPA裂解液获得得蛋白可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度；使用Bradford法测定由本裂解液裂解所得到样品的蛋白浓度会稍有误差。
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)
产品特点
1．可以很好的裂解细胞膜及细胞核，从而更好的完全释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白。
2．对于核蛋白，经本品裂解后，核蛋白与粘稠的基因组DNA分离，离心后核蛋白存在于上清中，核蛋白的捕获率高达90%。
3．对于膜蛋白，WesternBlotRIPALysisBuffer可最大程度的破坏细胞膜和变性蛋白，使蛋白与膜分离，防止蛋白与膜复合物在离心后沉淀，从而防止蛋白丢失。
4．在提取蛋白过程中，基因组DNA释放使得蛋白提取液变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。
储存条件置于室温阴凉处，可保存2年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
D-(+)-Gluconic acid δ-lactone葡萄糖内酯100毫克BR，90%
D-(+)-Galacturonic acid右旋水解糖2KU高，
D（+）-ArabitolD-树胶糖5KU高，
D-(-)Salicin柳1克BR，97%，a型
Cytosine4--2-羟嘧250UBR，99%
Cytochrome C细胞血素C100克BR，0.5u/mg
Cytochalasin B松胞菌素B1公斤BR，600u/mg，猪胰
Cytisine野靛5克BR
Cytidine胞嘧核苷7.5KUBR，
Cys-GlyH-半胱-甘-OH100克BR，
CyDTA反-1,2-二-N,N,N',N'-四25克BR，97%，油状
Cyclosporin A环孢A100毫克BR，2ml/支
Cyclopentanone oxime环肟100毫克CP，
Cyclopentanol羟环500克AR，99%
Cyclooctanone环辛25克BR，97%
RIPA裂解缓冲液(WesternBlot)哪家好D-缬酯盐盐LovastatinPRRSV M protein 猪蓝耳病病M蛋白抗体OMgp-Ab ELISA Kit 小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体小鼠白介16(IL-16)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产β-酯盐盐Formononetin特价供应CPN10 叶绿体伴侣蛋白抗体（苹）(Ntn1)ELISA Kit 大鼠轴突生长诱向子1大鼠白介16(IL-16)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-天冬二酯盐盐Pseudoginsenoside- F11现货促销FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病LZM (Rabbit Lysozyme) ELISA Kit 兔溶菌酶鸡白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-天冬-β-酯盐盐Ginsenoside Rb1特价促销Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) /瘦肉抗体IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit β干扰白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验相关实验
Westernblot基本流程 1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置于振荡器上，直至鼻涕状液体消失）。冰上放置至少半小时。 2.煮蛋白：12000rpm，15min离心，吸取上清，加入Loading buffer后于沸水中煮5min
Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30 μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4 ℃ 4. 加入PMSF（每克组织30 μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分钟 5. 移入离心管4 ℃ 约20,000 g（约15,000转）15分钟
-PAGE 用免疫沉淀后的样品可直接进行一维凝胶电泳，或者对磁珠上的蛋白 A 或蛋白 G 进行耦联剂修饰，洗脱后的样品可进行 WesternBlot。 RIPA 裂解液： 150mmol/L NaCl；1.0%NP-40；0.5%脱氧胆酸钠； 0.1%SDS；50mmol/L Tris， （pH 8.0）。
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