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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
41
- 英文名：
Antifade Polyvinylpyrrolidone Mounting Medium
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
5ml
实验报告：
一、抗荧光淬灭PVP封片液规格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：抗荧光淬灭PVP封片液规格
英文名称：Antifade Polyvinylpyrrolidone Mounting Medium
产品规格：5ml
发货周期：1～3天
本品是一种采用polyvinylpyrrolidone(PVP)为主要封片介质，用于减缓荧光淬灭的封片试剂。可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。操作简单，在封片时用移液器滴一滴抗荧光淬灭封片液在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。本封片液封片后，不使用盖玻片也可以直接在显微镜下观察。PVP干燥后会在样品表面产生一层保护膜。本抗荧光淬灭PVP封片液是一种使用比较方便的抗荧光淬灭封片液，相对不易产生气泡，封片液的流动性比较好，封片比较方便。封片后盖上盖玻片，盖玻片会被很好地粘附在载玻片上。按照每个样品封片需要50微升计算，足够用于100个样品的封片。
注意事项
1.使用完毕，请注意拧好瓶盖。抗荧光淬灭PVP封片液中的水分不断挥发，会导致该封片液逐渐变得非常粘稠。本封片液本身有一定的粘稠性，粘稠度略高于甘油，但由于水分过度蒸发出现过于粘稠至不便使用或有微生物污染则宜丢弃。
2.使用本封片液封片后，随着封片液中的水分逐渐减少，折光率会逐渐上升。折光率的变化通常不会影响样品染色部位的观察，但会影响到样品未染色部分的观察。
3.荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。可以向选购各种型号的载玻片存储盒。
4.在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
储存条件-20℃，有效期一年。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
1 Casein 质量规格：BR
Vaseline 质量规格：BR
2 Sodium orthovanadate 质量规格：>96%,BR
1 Oxaloacetic acid 质量规格：>97%,BR
1,2,3,4四 Zinc sulfate, heptahydrate 质量规格：>99.5%,AR
2,7二羟 Potassium sodium tatrate, tetrahydrate 质量规格：>98%,BR
1代 Biuret 质量规格：>98%,BR
抗荧光淬灭PVP封片液规格ADCK4ADCK4蛋白抗体小鼠热休克蛋白40(Hsp40)ELISA试剂盒
ADCK3/CABC1伴侣蛋白bc1同源复合体抗体小鼠β淀样蛋白140(Aβ140)ELISA试剂盒110827(Cy...
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培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
一、抗荧光淬灭PVP封片液规格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：抗荧光淬灭PVP封片液规格英文名称：Antifade Polyvinylpyrrolidone Mounting Medium
产品规格：5ml
发货周期：1～3天
本品是一种采用polyvinylpyrrolidone(PVP)为主要封片介质，用于减缓荧光淬灭的封片试剂。可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。操作简单，在封片时用移液器滴一滴抗荧光淬灭封片液在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。本封片液封片后，不使用盖玻片也可以直接在显微镜下观察。PVP干燥后会在样品表面产生一层保护膜。本抗荧光淬灭PVP封片液是一种使用比较方便的抗荧光淬灭封片液，相对不易产生气泡，封片液的流动性比较好，封片比较方便。封片后盖上盖玻片，盖玻片会被很好地粘附在载玻片上。按照每个样品封片需要50微升计算，足够用于100个样品的封片。
注意事项
1.使用完毕，请注意拧好瓶盖。抗荧光淬灭PVP封片液中的水分不断挥发，会导致该封片液逐渐变得非常粘稠。本封片液本身有一定的粘稠性，粘稠度略高于甘油，但由于水分过度蒸发出现过于粘稠至不便使用或有微生物污染则宜丢弃。
2.使用本封片液封片后，随着封片液中的水分逐渐减少，折光率会逐渐上升。折光率的变化通常不会影响样品染色部位的观察，但会影响到样品未染色部分的观察。
3.荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。可以向选购各种型号的载玻片存储盒。
4.在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
储存条件-20℃，有效期一年。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
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2 Sodium orthovanadate 质量规格：>96%,BR
1 Oxaloacetic acid 质量规格：>97%,BR
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1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验相关实验
immyself 有那种干了之后会把盖玻片牢牢粘著的吗？ 现在用的封片剂是液态的，老是滑来滑去 谢谢！ hongfunv1984 我最近也在做细胞免疫荧光，也是发现这个问题。后来发现是防淬灭剂加的太多了，现在在做实验室就没有这种情况了。。你可以稍加一点就行了。用10*10的盖玻片封片。 photomedicine 是的，防淬灭剂不能加太多，否则会滑来滑去，加1-2滴其实就够
纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察采集图像。
Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。 5. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。 6. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。 7. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 二、悬浮细胞 1. 离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内，加入0.5 ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 2. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次
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