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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
53
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海抚生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
200ml/KIT
产品名称 鹅脾脏中性粒细胞分离液试剂盒多少钱
规格: 200ml/KIT
储存条件 2-8℃
单位 盒
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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文献和实验后细胞悬液呈暗红色,需将其进行适量稀释后再进行后续操作。 5)为保证细胞的活力,整个操作过程请轻柔,避免对细胞造成机械性的损伤。 6)为保持细胞状态良好,请尽量缩短整个试验的周期。 4 脾脏单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对不同种属动物脾脏单个核细胞分离的特点,开发了对应的单个核细胞分离试剂盒,包括人,猴,犬,大鼠,小鼠,兔,猪等。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分,各成分对细胞无毒性,不会影响细胞的原始状态;同时,该试剂盒操作简单便捷,可大大缩短细胞分离时间
细胞筛网置于培养皿中,取小鼠脾脏放置于筛网中,加入 5ml 达优小鼠淋巴细胞分离液,对脾脏轻轻进行研磨(注:此步操作要快,避免分离液蒸发); 2. 把悬有脾脏细胞的的分离液立即转移至 15ml 离心管中,随后在分离液上层轻轻覆盖 500-1000μl 的 RPMI1640 培养基(保持分离液与培养基分界明显); 3. 室温,水平转子 800g 离心 30 分钟,设置离心机为缓升缓降; 4. 离心结束后吸出淋巴细胞层(白膜层),加入 10ml RPMI1640 洗涤一遍细胞,250g 离心 10
试验。 3 注意事项 1) 血液新鲜程度是影响分离效果的关键因素,请尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离。 2) 为保证细胞的活力,整个操作过程请轻柔,避免对细胞造成机械性的损伤。 3) 为保持细胞状态良好,请尽量缩短整个试验的周期。 4 动员外周血单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对动员外周血单个核细胞分离的特点,开发了对应的单个核细胞分离试剂盒。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分,各成分对细胞无毒性,不会影响细胞的原始状态
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